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文檔簡介
1、目的:研究 JAK/STAT3信號通路在鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophila psittaci,Cps)抑制細胞凋亡中的作用,為進一步明確衣原體的致病機制提供理論基礎和實驗依據(jù)。
方法:以 MOI為3的 Cps感染 HeLa細胞,用星狀孢子素(Staurosporine,STS)誘導細胞凋亡,同時設未誘導組和HeLa細胞空白對照組。運用DNA ladder法和熒光染色法檢測細胞凋亡情況;運用 RT-qPCR( rever
2、se transcription quantitative polymerase chain reaction)及Western blot法檢測各組STAT3、JAK1及JAK2的mRNA及其蛋白表達水平。
用 JAK/STAT3信號通路特異性抑制劑 AG490作用于 Cps感染HeLa細胞,加入星狀孢子素誘導細胞凋亡。采用熒光染色法和流式細胞術檢測各組細胞凋亡情況。Western blot檢測各組細胞中凋亡相關蛋白Bcl-2
3、、Bax及Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、PARP的表達水平。
結果:Cps感染細胞較正常HeLa細胞組DNA條帶明顯減弱,且未出現(xiàn)梯狀條帶;Hoechst33258細胞核染結果也顯示Cps感染細胞內凋亡小體數(shù)量明顯減少,細胞形態(tài)接近于正常,顯示Cps一定的抗凋亡作用。STAT3基因在 Cps感染后第6h和第12h明顯上調,JAK1基因在第4h明顯上調,JAK2基因在第2h明顯上調。Western
4、blot檢測STAT3、JAK1及其磷酸化水平,發(fā)現(xiàn)在Cps感染后STAT3、JAK1 總蛋白和磷酸化蛋白水平均顯著上調。
熒光染色法和流式細胞術檢測細胞凋亡率,發(fā)現(xiàn)AG490抑制Cps感染組的細胞凋亡率顯著低于 STS誘導 Cps感染組而明顯高于 Cps感染細胞組。Western blot檢測相關凋亡蛋白結果顯示,AG490抑制Cps感染細胞組Bax/Bcl-2比值、Caspase-3、Caspase-7、Casp
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