鸚鵡熱衣原體檢測技術研究及重慶鸚鵡熱衣原體流行病學調查.pdf

1、鸚鵡熱衣原體（Chlamyida psittaci）引起的人畜共患病日趨嚴重，但其診斷尚缺乏準確快速的檢測手段。因此迫切需要建立準確、快速的鸚鵡熱衣原體PCR和RT-QPCR檢測方法。為此，我們利用PCR和RT-QPCR建立了準確、快速的檢測方法，研制出鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒；利用建立的定量PCR檢測初步探索了鸚鵡熱衣原體感染同檢測間的量化關系；并利用建立的PCR方法同IHA方法對比進行流行病學調查。本研究主要獲得以下研究結果：<

2、br>　?、冫W鵡熱衣原體PCR檢測方法的建立。利用NCBI上公布的鳥源主要外膜蛋白MOMP基因序列（PSITTACI457203）設計引物，利用鴨源 CS1 DNA為模板，通過優(yōu)化反應體系，得到100 bp的目標檢測片段，建立了鸚鵡熱衣原體的PCR檢測方法，靈敏度可以達到2.5×10-5 ng/μl模板量，構建了鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒。
　?、邴W鵡熱衣原體Real-time quantitative PCR檢測方法的建立。將

3、PCR擴增得到的目標片段作為Real-time quantitative PCR的模板和陽性對照，利用兩種定量PCR儀分別建立了鸚鵡熱衣原體定量 PCR反應體系。所建立的Real-time quantitative PCR檢測方法，在模板濃度范圍1.78×102-1.78×108拷貝/μl時，其線性相關系數(shù)達到0.998；融解曲線只有唯一的峰值，Tm值為79.1℃；批內和批間變異系數(shù)(CV％)分別為1.30-4.59%和5.72-9.8

4、7%。
　　③利用建立的鸚鵡熱衣原體Real-time quantitative PCR檢測方法進行小白鼠感染的量化分析試驗。通過對隨機分成的7組，每組12只的小白鼠，一組為對照組，其他各組同時腹腔注射Cps菌液，每天進行1次抽樣檢測，監(jiān)控小白鼠感染后的體內 Cps量的變化關系，初步探索了動物 CPS感染和Real-time quantitative PCR檢測的量化關系。
　　④對重慶市6個區(qū)縣不同養(yǎng)殖環(huán)境下的禽類隨機采集