鸚鵡熱衣原體檢測技術(shù)研究及重慶鸚鵡熱衣原體流行病學調(diào)查.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鸚鵡熱衣原體(Chlamyida psittaci)引起的人畜共患病日趨嚴重,但其診斷尚缺乏準確快速的檢測手段。因此迫切需要建立準確、快速的鸚鵡熱衣原體PCR和RT-QPCR檢測方法。為此,我們利用PCR和RT-QPCR建立了準確、快速的檢測方法,研制出鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒;利用建立的定量PCR檢測初步探索了鸚鵡熱衣原體感染同檢測間的量化關(guān)系;并利用建立的PCR方法同IHA方法對比進行流行病學調(diào)查。本研究主要獲得以下研究結(jié)果:<

2、br>  ①鸚鵡熱衣原體PCR檢測方法的建立。利用NCBI上公布的鳥源主要外膜蛋白MOMP基因序列(PSITTACI457203)設(shè)計引物,利用鴨源 CS1 DNA為模板,通過優(yōu)化反應體系,得到100 bp的目標檢測片段,建立了鸚鵡熱衣原體的PCR檢測方法,靈敏度可以達到2.5×10-5 ng/μl模板量,構(gòu)建了鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒。
 ?、邴W鵡熱衣原體Real-time quantitative PCR檢測方法的建立。將

3、PCR擴增得到的目標片段作為Real-time quantitative PCR的模板和陽性對照,利用兩種定量PCR儀分別建立了鸚鵡熱衣原體定量 PCR反應體系。所建立的Real-time quantitative PCR檢測方法,在模板濃度范圍1.78×102-1.78×108拷貝/μl時,其線性相關(guān)系數(shù)達到0.998;融解曲線只有唯一的峰值,Tm值為79.1℃;批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV%)分別為1.30-4.59%和5.72-9.8

4、7%。
 ?、劾媒⒌柠W鵡熱衣原體Real-time quantitative PCR檢測方法進行小白鼠感染的量化分析試驗。通過對隨機分成的7組,每組12只的小白鼠,一組為對照組,其他各組同時腹腔注射Cps菌液,每天進行1次抽樣檢測,監(jiān)控小白鼠感染后的體內(nèi) Cps量的變化關(guān)系,初步探索了動物 CPS感染和Real-time quantitative PCR檢測的量化關(guān)系。
 ?、軐χ貞c市6個區(qū)縣不同養(yǎng)殖環(huán)境下的禽類隨機采集

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