Wnt通路調控因子Pygo2在肝癌發(fā)病機制中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.研究Wnt信號通路調控因子Pygo2在肝癌、癌旁組織及肝癌細胞系中的表達水平，評價Pygo2在肝癌中的預后價值；
　　2.研究下調 Pygo2表達對肝癌細胞生長、增殖等細胞生物學的影響，初步探索Pygo2通過影響Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機制。
　　3.研究炎癥因子IL-22與Pygo2的相關性及在診斷肝癌復發(fā)中的應用價值。
　　方法：
　　1.利用Rea

2、l-time PCR、免疫組化檢測肝癌、癌旁組織中Pygo2的表達情況，利用Western blot檢測5種不同侵襲轉移潛能肝癌細胞系中Pygo2的表達情況，利用統(tǒng)計學方法分析Pygo2的不同表達水平與原發(fā)性肝癌患者預后的相關性；
　　2.利用shRNA技術建立Pygo2表達下調的肝癌細胞系SK-Hep1、Hep3B，分別采用CCK-8法細胞活性實驗、平板克隆形成實驗、裸鼠體外荷瘤實驗、免疫組化、Real-time PCR、雙熒光

3、素酶報告基因的方法研究 Pygo2表達下調對肝癌細胞生長、增殖等細胞生物學特性的影響并初步探索Pygo2通過影響Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機制。
　　結果：
　　1.從轉錄水平、蛋白水平證實Pygo2表達在肝癌組織中較癌旁組織明顯增高（P<0.01）；Pygo2表達與肝癌細胞系侵襲轉移潛能呈正相關；Pygo2表達與肝癌患者預后呈負相關(P<0.05)。
　　2.通過生長、增殖、克隆形

4、成、裸鼠荷瘤等實驗發(fā)現，與對照組相比，Pygo2表達下調后肝癌細胞系生長、增殖和成瘤能力明顯減弱；通過雙熒光素酶報告基因檢測、Real-time PCR發(fā)現，Pygo2表達下調后Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達降低，尤以c-myc為甚，在mRNA水平Pygo2與c-myc呈正相關。
　　3.肝癌復發(fā)患者血清中IL-22水平與Pygo2表達量呈正相關，肝癌復發(fā)組患者血清IL-22水平明顯增高。
　　結論：