白藜蘆醇對(duì)TNF-α誘導(dǎo)人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖的影響和調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路的研究.pdf

1、背景:
　　類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)作為彌漫性結(jié)締組織疾病之一，已成為世界范圍內(nèi)的健康問(wèn)題，嚴(yán)重影響病人及其家人的生活質(zhì)量及身心健康。RA是一種慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，主要以關(guān)節(jié)滑膜為主要靶組織。介導(dǎo)關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞為成纖維樣滑膜細(xì)胞，主要病理表現(xiàn)為滑膜組織異常增殖、滑膜下層炎癥侵潤(rùn)，滑膜炎可引起關(guān)節(jié)中骨與軟骨的持續(xù)損害，RA發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確。RA的發(fā)病與多種細(xì)胞因子相關(guān)，腫瘤壞死

2、因子-α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）是其中重要參與因子之一。目前，對(duì)RA的主要研究集中于滑膜細(xì)胞中異常的信號(hào)途徑，Wnt信號(hào)通路在多種細(xì)胞增殖與分化方面有著關(guān)鍵調(diào)控作用，在RA滑膜炎癥以及調(diào)節(jié)骨代謝過(guò)程中起重要作用，其中Wnt/β-catenin信號(hào)通路目前研究最為詳盡，鑒于Wnt信號(hào)通路在RA的FLS中的重要調(diào)控作用，干預(yù)wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的各個(gè)環(huán)節(jié)成為治療RA的新靶點(diǎn)。白藜蘆醇(resve

3、ratrol，Res)廣泛存在于虎杖、花生及葡萄等植物當(dāng)中，是多酚類(lèi)化合物之一，具有抗氧化、抗衰老、抗炎癥及保護(hù)心血管的作用，祖國(guó)醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)虎杖根（主要有效成分為白藜蘆醇）能治療關(guān)節(jié)的炎癥。近年研究者發(fā)現(xiàn)Res能誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡，而RA中成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)的增殖與分化類(lèi)似于腫瘤細(xì)胞的特性。就此，本課題以滑膜細(xì)胞為研究對(duì)象，研究TNF-α對(duì)成纖維樣滑膜細(xì)胞的影響，從Wn

4、t信號(hào)通路方面進(jìn)一步研究白藜蘆醇對(duì)成纖維樣滑膜細(xì)胞作用可能的分子機(jī)制。
　　目的:
　　1.觀察TNF-α對(duì)人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞(Human Fibroblast-likesynoviocyte of rheumatoid arthritis，HFLS-RA)增殖的影響，以及觀察不同濃度的白藜蘆醇對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA增殖的影響。
　　2.觀察TNF-α對(duì)HFLS-RA中Wnt信號(hào)通路的調(diào)控，以及不

5、同濃度的Res對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA的Wnt信號(hào)通路的影響。
　　方法:
　　1.復(fù)蘇購(gòu)買(mǎi)的HFLS-RA細(xì)胞株后，培養(yǎng)傳代至第3-5代備用。
　　2.采用TNF-α(10μg/l)處理HFLS-RA24h后，運(yùn)用CCK8法觀察TNF-α對(duì)HFLS-RA增殖的影響。
　　3.不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)干預(yù)HFLS-RA后再用10μg/

6、l的TNF-α刺激24h，用CCK8法測(cè)定Res對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA生長(zhǎng)的影響。
　　4.將濃度為10μg/l的TNF-α加入HFLS-RA中共同孵育30min，運(yùn)用Western-blot檢測(cè)其與空白對(duì)照組的sFRP4、β-catenin及C-myc蛋白的表達(dá)水平。
　　5.將不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)與HFLS-RA共同孵育24h后，再用1

7、0μg/l的TNF-α刺激30min，用Western-blot檢測(cè)Res對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA中sFRP4、β-catenin及C-myc蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.HFLS-RA由TNF-α誘導(dǎo)后，HFLS-RA增殖明顯增強(qiáng)，不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)對(duì)TNF-α誘導(dǎo)后的HFLS-RA增殖有抑制作用，并呈劑量依賴(lài)性。
　　2.

8、經(jīng)Western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TNF-α誘導(dǎo)后的HFLS-RA與空白對(duì)照組相比較，sFRP4的表達(dá)水平降低，β-catenin及C-myc的表達(dá)水平增高。(P＜0.05)
　　3.與TNF-α組相比較，經(jīng)Western-blot方法分析顯示:不同濃度Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)組能降低TNF-α誘導(dǎo)后的HFLS-RA的β-catenin及C-myc的蛋白表達(dá)水平，sFR