NO介導的結腸癌LoVo細胞與內皮細胞相互作用在腫瘤血管生成中作用的研究.pdf

1、研究目的 1．觀察結腸癌LoVb細胞對內皮細胞增殖的影響。 2．觀察結腸癌LoVo細胞與內皮細胞相互作用對NO產生、NOS活力、促血管生成因子和信號通路分子表達及內皮細胞形態(tài)學的影響，探討這種細胞間相互作用在腫瘤血管生成中的作用。 3．明確NO在結腸癌LoVo細胞與內皮細胞間相互作用中的介導作用，及L-NAME的干預。 4．建立體外研究腫瘤血管生成的實驗模型。 研究方法

2、 1．利用結腸癌LoVb細胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)，并設對照組、L-NAME干預組和L-NAME對照組，培養(yǎng)0h、24h、48h后，用MTT法檢測各組HUVECs增殖情況。 2．采用雙層共培養(yǎng)方法，建立結腸癌LoVo細胞與HUVECs相互作用模型，設HUEVCs自身共培養(yǎng)對照組、L-NAME干預組和L-NAME對照組，培養(yǎng)0h、12h、24h、36h、48h后采用分光光度比色法檢測共培養(yǎng)上清中NO

3、含量和NOS的活力，觀察共培養(yǎng)的HUVECs形態(tài)學改變，采用免疫細胞化學法、Western Blotting分別檢測HUVECs中VEGF、MMP-2、EMMPRIN、IGFBP-7及NF．KBp65表達情況。 研究結果 1．條件培養(yǎng)組HUVECs增殖活力明顯強于對照組(P<0.05)，L—NAME干預組HUVECs增殖活力較條件培養(yǎng)組下降(P<0.05)，L-NAME對照組HUVECs的增殖情況與對照組相比沒有

4、明顯差異(P>0.05)。 2．HUVECs與結腸癌LoVo細胞共培養(yǎng)時，共培養(yǎng)上清中NO含量、NOS的活力明顯強于對照組(P<0.05)，L-NAME干預組培養(yǎng)上清中NO含量降低、NOS的活力顯著降低(P<0.05)，L-NAME對照組與對照組相比沒有明顯差異(P>0.05)。 3．HUVECs與結腸癌LoVo細胞共培養(yǎng)時，HUVECs中VEGF、MMP-2、EMMPRIN、IGFBP-7表達較對照組增高(P<

5、0.05)，NF-KBp65活化；L-NAME干預組上述因子表達較共培養(yǎng)組降低(P<0.05)，NF-KBp65的活化受到抑制；L-NAME對照組與對照組相比沒有明顯差異(P>0.05)。 4．HUVECs與結腸癌LoVo細胞共培養(yǎng)時，HUVECs形態(tài)明顯改變，形成大量管樣結構，對照組HUVECs形態(tài)多呈圓形、多邊形，未見管樣結構形成；L-NAME干預組HUVECs為圓形或多邊形，管樣結構基本消失；L-NAME對照組HUVE

6、Cs形態(tài)與對照組相比沒有明顯差異。 研究結論 1．LoVo細胞能夠促進內皮細胞增殖。 2．LoVo細胞與內皮細胞之間存在異常的相互作用，這種異常相互作用促進腫瘤血管生成。 3．NO是LoVo細胞與內皮細胞間相互作用的關鍵信號，NO可能通過活化NF-KB信號通路，上調促血管生成因子的表達。 4．L-NAME通過抑制 NO 的產生阻斷 LoVo 細胞與內皮細胞間異常的相互作用，從而