NES1基因超甲基化在肝癌發(fā)病機(jī)制中的研究.pdf

1、目的：探討NES1基因在正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)、甲基化狀態(tài)，及甲基化對(duì)基因表達(dá)和細(xì)胞生物學(xué)的影響。
　　方法：用RT-PCR和RT-QPCR檢測(cè)NES1mRNA在正常肝細(xì)胞L02以及肝癌細(xì)胞株HepG2中的表達(dá)水平，用MSP檢測(cè)NES1基因的甲基化水平。用去甲基化藥物（5-aza-dC）處理肝癌細(xì)胞株后,再用RT-QPCR檢測(cè)NES1mRNA的表達(dá)水平，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率，Western Blot檢測(cè)cyclinD1

2、,P21,P53表達(dá)水平。
　　結(jié)果：NES1mRNA在正常肝細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于肝癌細(xì)胞株。肝癌細(xì)胞株中NES1外顯子3 CpG島的甲基化水平較正常肝細(xì)胞明顯升高。肝癌細(xì)胞株經(jīng)去甲基化藥物處理后，NES1 mRNA表達(dá)水平明顯上升，細(xì)胞的存活率明顯下降,P21,P53表達(dá)水平明顯上升, cyclinD1表達(dá)水平明顯下降。
　　結(jié)論：NES1基因外顯子3 CpG島的超甲基化和它在肝癌細(xì)胞株中的低表達(dá)相關(guān)，在肝癌細(xì)胞中NE