噪聲暴露后靜脈移植BMSCs對大鼠內(nèi)耳的修復作用.pdf

1、噪聲性創(chuàng)傷是一種因長期接觸噪聲刺激所引起的以聽力損失為主的緩行性、多系統(tǒng)性的損傷。其中噪聲對聽力的特異性損傷稱為噪聲性耳聾(NoiseInducedHearingLoss，NIHL)，屬于感音神經(jīng)性耳聾的一種。NIHL主要的病理生理機制是毛細胞、支持細胞及螺旋神經(jīng)元細胞的損傷?，F(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn)哺乳動物的內(nèi)耳毛細胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細胞損傷后自我再生能力非常有限，要在病因?qū)W方面來治療感音神經(jīng)性耳聾將是一項巨大的挑戰(zhàn)，而干細胞的替代移植治療是一個突破

2、口。
　　目的：
　　長期接觸噪聲刺激可破壞內(nèi)耳毛細胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細胞；而哺乳動物內(nèi)耳毛細胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細胞損傷后的自我再生能力有限。為尋找有效而可靠的治療感音神經(jīng)性耳聾的方法，我們通過靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細胞（BoneMarrowMesenchymalStemCells，BMSCs）至噪聲性聾SD大鼠體內(nèi)來研究干細胞細胞替代治療對噪音性聾大鼠的內(nèi)耳修復作用。
　　方法：
　　BMSCs的培養(yǎng)與標記：培養(yǎng)穩(wěn)定傳代

3、的BMSCs，用紅色熒光染料Pkh26標記細胞。
　　噪聲性耳聾模型：將6周齡健康SD大鼠置于4000Hz，120dBSPL聲強度的窄帶白噪音下持續(xù)暴露9h。
　　經(jīng)尾靜脈移植BMSCs:36只6周齡健康大鼠平均分為A、B和C三組。A組（non-NIHL+BMSCs）：未造聾，經(jīng)尾靜脈移植pkh26標記的BMSCs；B組(NIHL+non-BMSCs）:造聾2天后經(jīng)尾靜脈注射等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基；C組(NIHL+BMSCs):造聾

4、2天后，經(jīng)尾靜脈移植等量標記的BMSCs。
　　耳蝸組織冰凍切片：靜脈移植BMSCs6周后，處死各組大鼠4只，行耳蝸冰凍切片，通過免疫組織熒光染色觀察移植細胞的存活、分布及是否表達毛細胞標記物（MyosinVIIa、Math1）和螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細胞標記物（Neurofilament-M,Map2）。
　　基底膜鋪片：分別于BMSCs靜脈移植2周后及6周后處死各組大鼠4只，取一側(cè)耳蝸用于基底膜鋪片觀察毛細胞的形態(tài)及計數(shù)外毛細

5、胞缺失率。
　　6.耳蝸中軸HE染色：取BMSCs移植6周后處死的各組大鼠另一側(cè)耳蝸4只，耳蝸中軸石蠟切片，HE染色，觀察SGCs形態(tài)變化及計數(shù)其細胞密度。
　　結(jié)果：
　　復蘇的BMSCs能夠穩(wěn)定傳代，并且形態(tài)均一呈長梭形，渦旋狀排列。Pkh26標記細胞后，染料能夠均勻的分布于細胞膜表面。
　　C組大鼠耳蝸蝸軸、基底膜和血管紋中可見紅色熒光標記的細胞，部分細胞可表達螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元標記物和毛細胞標記物。A、B組

6、大鼠耳蝸未見明顯紅色熒光。
　　毛細胞主要的損傷、缺失部位是耳蝸底回末段和第二回起始段，外毛細胞以缺失為主，內(nèi)毛細胞以部分細胞琥珀酸脫氫酶活性的下降為主。
　　在移植細胞后2周時，細胞移植組及造聾組外毛細胞的缺失率無明顯下降，在移植6周時，可見細胞移植組毛細胞缺失率有一定程度的下降。
　　在細胞移植6周時，C組螺旋神經(jīng)節(jié)細胞密度相較于B組有所增加。
　　結(jié)論：
　　1、復蘇的BMSCs能夠穩(wěn)定傳代并高效率的