枯草芽胞桿菌BSn5中新型抑菌蛋白APn5的鑒定及性質(zhì)研究.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文枯草芽胞桿菌BSn5中新型抑菌蛋白APn5的鑒定及性質(zhì)研究姓名：韓冬梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫明20080601華中農(nóng)業(yè)人學(xué)碩士學(xué)位論文2008全基因組序列，進(jìn)行了初步分析，結(jié)果表明該菌株具有l(wèi)O個(gè)質(zhì)粒。在質(zhì)粒的測(cè)序拼接過(guò)程中，由于插入因子和重復(fù)序列的大量存在，導(dǎo)致在質(zhì)粒的前后拼接結(jié)果有所不同。尤其是pBMB69和pBMB95是否是兩個(gè)不同的質(zhì)粒還是一個(gè)質(zhì)粒上存在著很大分歧。在上述

2、研究基礎(chǔ)上，本研究利用構(gòu)建質(zhì)粒物理圖譜的方法，對(duì)于蘇云金芽胞桿菌YBT1520測(cè)序拼接中前后拼接結(jié)果不同的質(zhì)粒pBMB69和pBMB95以及plasmid137進(jìn)行了驗(yàn)證。根據(jù)在質(zhì)粒pBMB69和pBMB95的復(fù)制子ori44和ori60以及在這兩個(gè)質(zhì)粒上均存在的crylAclO基因序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR的方法篩選已構(gòu)建好的蘇云金芽胞桿菌YBT1520全基因組BAC文庫(kù)。在篩選文庫(kù)的過(guò)程中，共獲得了9個(gè)可以同時(shí)擴(kuò)增出ori44和cry

3、lAclO基因的轉(zhuǎn)化子，1個(gè)可以同時(shí)擴(kuò)增出ori60和crylAclO基因的轉(zhuǎn)化子。利用NotI對(duì)這些轉(zhuǎn)化子進(jìn)行酶切驗(yàn)證，從中篩選出裝載的外源片段最大的轉(zhuǎn)化子EMB2H05(含有pBMB69片段)和EMB2D10(含有pBMB95片段)。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，選擇合適的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切分析，利用瓊脂糖凝膠普通電泳和脈沖電泳分析酶切片段并估計(jì)大小，最終構(gòu)建物理圖譜。本研究繪制出了質(zhì)粒pBMB69的全部序列和pBMB95上重復(fù)區(qū)域的物理圖譜。與