GRM5在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移及侵襲能力關(guān)系的研究.pdf

1、研究目的：
　　1.研究GRM5（代謝性谷氨酸受體5）在膠質(zhì)瘤表達(dá)與膠質(zhì)瘤病理級別的相關(guān)性；
　　2.研究GRM5對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移及侵襲能力的影響。
　　研究方法：
　　1.為了研究膠質(zhì)瘤組織中GRM5表達(dá)情況，我們收集了本院神經(jīng)外科13例膠質(zhì)瘤標(biāo)本，所有標(biāo)本均依據(jù)2007年世界衛(wèi)生組織（World Health Origanization,WHO）中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理診斷并分級。應(yīng)用免疫組

2、化的方法檢測膠質(zhì)瘤標(biāo)本中GRM5的表達(dá)情況。
　　2.為了研究GRM5對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移能力的影響，我們設(shè)計(jì)合成了2條特異性針對人GRM5基因的小分子干擾RNA(GRM5-siRNA-1247，GRM5-siRNA-1587),及對照RNA(GRM5-siRNA-NC);轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞株48h后用Western blot（蛋白質(zhì)印跡法）檢測GRM5的表達(dá)情況；
　　3.用轉(zhuǎn)染后的U251細(xì)胞做劃痕實(shí)驗(yàn)和 Tansw

3、ell實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證轉(zhuǎn)染小分子RNA(GRM5-siRNA-1247，GRM5-siRNA-1587)，干擾GRM5表達(dá)后U251細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.免疫組化結(jié)果顯示GRM5在人低級別和高級別膠質(zhì)瘤中均有表達(dá)，且隨腫瘤級別增高，表達(dá)量也增高，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染小分子干擾RNA(GRM5-siRNA-1247)后

4、GRM5表達(dá)量明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.020,P＜0.05）。
　　3.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染小分子干擾RNA(GRM5-siRNA-1247)后，細(xì)胞劃痕傷口愈合率明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（24h t=6.751,P＜0.01;48h t=8.668 P＜0.01）。
　　4.Tanswell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染小分子干擾RNA(GRM5-siRNA-1247)后，細(xì)胞侵襲能力明顯