miR-101靶向調(diào)節(jié)Girdin表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移研究.pdf

1、目的:
　　我們先前的研究證實(shí)了Girdin蛋白在肝癌中高表達(dá)，本研究旨在探索在肝癌中Girdin高表達(dá)的原因，并證明miR-101確實(shí)能通過(guò)靶向調(diào)控Girdin的表達(dá)而發(fā)揮抑制肝癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
　　方法:
　　(1)采用qRT-PCR法分別檢測(cè)肝癌及癌旁組織Girdin mRNA的表達(dá)水平;
　　(2)通過(guò)Targetscan、miRanda預(yù)測(cè)調(diào)控Girdin表達(dá)的miRNA;
　　(3)

2、 qRT-PCR法分別檢驗(yàn)肝癌及癌旁組織miR-101的表達(dá)水平;
　　(4)使用qRT-PCR、Western blot法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-101對(duì)HEPG2細(xì)胞Girdin mRNA及蛋白表達(dá)水平的影響;
　　(5)先行構(gòu)建Girdin-3'UTR質(zhì)粒，再將質(zhì)粒及miR-101mimics轉(zhuǎn)染至HEPG2細(xì)胞;行雙熒光素酶檢測(cè)驗(yàn)證Girdin是否為miR-101的直接靶基因;
　　(6)使用CCK法測(cè)驗(yàn)miR-1

3、01對(duì)HEPG2細(xì)胞增殖能力的影響;
　　(7)運(yùn)用細(xì)胞劃痕法檢測(cè)miR-101對(duì)HEPG2細(xì)胞遷移能力的影響;
　　(8)應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)miR-101對(duì)HepG2細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　結(jié)果:
　　(1) Girdin mRNA在肝癌組織的表達(dá)高于癌旁組織;
　　(2)Targetscan、miRanda軟件示Girdin-3'UTR有miR-101的結(jié)合區(qū)域;
　　(3)miR-

4、101在肝癌組織的表達(dá)低于癌旁組織;
　　(4)轉(zhuǎn)染miR-101后的HEPG2細(xì)胞Girdin mRNA及蛋白表達(dá)水平下調(diào);
　　(5)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)示轉(zhuǎn)染miR-101能抑制Girdin-3'UTR熒光素酶活性;
　　(6)轉(zhuǎn)染miR-101后HEPG2細(xì)胞的增殖能力減弱;
　　(7)轉(zhuǎn)染miR-101后HEPG2細(xì)胞的遷移能力減弱;
　　(8)轉(zhuǎn)染miR-101后HEPG2細(xì)胞的侵襲能力減弱。