子癇前期患者外周血中Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞病理性轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、子癇前期（Pre-eclampsia，PE）仍是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍生兒高發(fā)病率和高死亡率的重大疾病之一，其發(fā)病率為5％～10%。關(guān)于PE病因?qū)W的研究層出不窮，但是其確切病因和發(fā)病機(jī)制至今仍未被完全闡明，也缺乏有效的預(yù)防和治療手段。因此，不斷挖掘PE的病因和發(fā)病機(jī)制有重要的意義。
　　近年來(lái)，大量的證據(jù)表明母體對(duì)胎兒的免疫耐受失衡在PE的發(fā)病中起著重要作用，其中Treg（Regulatory T，Treg）細(xì)胞和Th17（T

2、helper17，Th17）細(xì)胞之間的免疫平衡對(duì)于免疫耐受的維持有重要作用。PE患者外周血和母胎局部均存在著Treg細(xì)胞數(shù)量減少和Th17細(xì)胞數(shù)量增多的現(xiàn)象，這使得Treg/Th17細(xì)胞免疫平衡向Th17細(xì)胞偏移。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞還具有可塑性，在適宜的條件下，Treg細(xì)胞可以向Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)化。CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的一種獨(dú)特的T細(xì)胞亞群，該群細(xì)胞同時(shí)具有Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的表型和功

3、能特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中存在著中間型細(xì)胞的產(chǎn)生。
　　PE中存在Treg/Th17細(xì)胞的免疫失衡，但其是否存在著Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)化目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究以CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞為研究切入點(diǎn)，以正常晚孕婦女為對(duì)照，檢測(cè)PE患者外周循環(huán)中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞的數(shù)量變化，分析CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與Treg和Th17細(xì)胞數(shù)量變化

4、的相關(guān)性，同時(shí)通過(guò)體外研究探討Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞的病理性轉(zhuǎn)化的影響因素，以期進(jìn)一步完善PE的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，為PE的治療提供新的線索和思路。
　　第一部分:子癇前期患者外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞的數(shù)量變化研究
　　目的：研究正常晚孕婦女和PE患者外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞的數(shù)量變化。
　　方法：以正常妊娠（Normal pregnancy，NP）婦女為對(duì)照組，PE

5、患者為病例組，分別采集NP組（n=40）和PE組（n=23）對(duì)象外周血（肝素抗凝），通過(guò)密度梯度離心法獲取其外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），分別用CD4-FITC、Foxp3-APC和IL17A-PE-Cy7三種單克隆熒光抗體進(jìn)行標(biāo)記染色，采用流式細(xì)胞（Flow cytometry，F(xiàn)CM）技術(shù)檢測(cè)兩組外周血中CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞、CD4+Foxp3+IL

6、-17+中間型細(xì)胞和CD4+IL-17A+Th17細(xì)胞的數(shù)量變化。
　　結(jié)果：與NP組比，PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞百分比明顯增加（P<0.01）；CD4+IL-17A+Th17細(xì)胞的百分比也明顯增加（P<0.01）；Treg/Th17比值明顯降低（P<0.01）；CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞占CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的比例均明顯增加（P<0.01）。
　　結(jié)

7、論：正常晚孕婦女和PE患者外周血中均存在CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞，且PE患者外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞的數(shù)量較正常晚孕婦女明顯增加。
　　第二部分:子癇前期患者CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞數(shù)量變化的相關(guān)性研究
　　目的：比較NP組和 PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞和CD4+IL-17

8、A+Th17細(xì)胞間數(shù)量變化的相關(guān)性。
　　方法：根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用Spearman相關(guān)性分析對(duì)NP組和PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞和CD4+IL-17A+Th17細(xì)胞的數(shù)量變化進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞間的數(shù)量變化有負(fù)相關(guān)性趨勢(shì)（r=-0.365），但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義（P>0.05）；NP組中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與 Th17細(xì)胞間的數(shù)量變化呈正相關(guān)性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=0.604，P<0.05）；這一相關(guān)性在PE組中更為明顯（r=0.803，P<0.01）；此外，NP組中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞占CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞的比例與Th17細(xì)胞數(shù)量變化呈正相關(guān)性（r=0.397，P<0.01）；PE患者中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞占CD4

10、+Foxp3+Treg細(xì)胞的比例與Th17細(xì)胞數(shù)量變化的相關(guān)性更為明顯（r=0.741，P<0.01）。
　　結(jié)論：外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細(xì)胞與Th17細(xì)胞的數(shù)量變化呈明顯正相關(guān)，且在PE中其相關(guān)性更為明顯。
　　第三部分:外周血中誘導(dǎo)Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞病理性轉(zhuǎn)化的影響因素研究
　　目的：探討外周血中誘導(dǎo)Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞病理性轉(zhuǎn)化的影響因素。
　　方法：通過(guò)磁珠分選分離出

11、NP婦女外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞，采用含IL-6/IL-23/IL-1β細(xì)胞因子的培養(yǎng)基對(duì)CD4+CD25+Treg細(xì)胞進(jìn)行體外刺激和培養(yǎng)，以模擬PE中高炎癥環(huán)境，采用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)前后與Treg和Th17細(xì)胞功能有關(guān)的關(guān)鍵基因（如Foxp3、IL-10和ROR-γt和IL-17A）的mRNA進(jìn)行檢測(cè)，以探索外周血中誘導(dǎo)CD4+CD25+Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞病理性轉(zhuǎn)化的影響因素。
　　結(jié)果：用含I