雷公藤多苷及其與白芍總苷配伍對成骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖、周期、凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　從細(xì)胞生物學(xué)角度出發(fā)，研究雷公藤內(nèi)酯（Triptolide）、雷公藤多苷及其與白芍總苷配伍對體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖、周期、凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，為雷公藤制劑治療強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)及對其成骨的影響機(jī)制提供實驗基礎(chǔ)，也為臨床上雷公藤的配伍治療提供一定的理論支撐。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞，用BrdU標(biāo)記法、流式細(xì)胞術(shù)和h

2、ochest染色法分別檢測不同濃度的雷公藤內(nèi)酯對細(xì)胞增殖、周期和凋亡的影響;再用western blot方法檢測細(xì)胞增殖、周期和凋亡相關(guān)蛋白（PCNA;CyclinD1、Cyclin E;Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3）的表達(dá)水平。
　　2.設(shè)立雷公藤多苷配伍白芍總苷、雷公藤多苷、雷公藤內(nèi)酯、白芍總苷及空白對照組5組，用MTT法檢測各組細(xì)胞增殖情況;并用western blot方法檢測周期及凋亡相關(guān)蛋白(C

3、yclinD1、Cyclin E及Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.不同濃度的雷公藤內(nèi)酯對MC3T3-E1細(xì)胞增殖、周期、凋亡及相關(guān)蛋白的影響:
　　(1)BrdU標(biāo)記法顯示7nM和14nM組細(xì)胞的吸光度值較0nM組明顯降低;
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)顯示細(xì)胞在G0-G1期的比例隨雷公藤內(nèi)酯濃度增加而增加;
　　(3)hochest染色發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯組中出

4、現(xiàn)凋亡細(xì)胞，隨濃度增加而增多，流式細(xì)胞術(shù)顯示晚期凋亡率隨雷公藤內(nèi)酯濃度的增加而升高;
　　(4)western blot顯示與0nM組相比，7nM、14nM組Cyclin D1和CyclinE含量明顯降低，Bax和cleaved-caspase-3含量顯著升高，14nM組PCNA和Bcl-2含量也明顯降低。
　　2.雷公藤多苷及與白芍總苷配伍對MC3T3-E1細(xì)胞增殖及周期、凋亡相關(guān)蛋白的影響:
　　(1)MTT法顯示

5、與空白組相比，雷公藤多苷配伍白芍總苷組、雷公藤多苷組、白芍總苷組吸光度值降低均不明顯，而雷公藤內(nèi)酯組顯著降低。
　　(2)western blot結(jié)果顯示:
　?、倮坠俣嘬张湮榘咨挚傑战M較空白組Bcl-2、Bax和cleaved-caspase-3升高;較雷公藤多苷組Bcl-2升高，cleaved-caspase-3明顯降低，Bax無明顯差異;較雷公藤內(nèi)酯組Bcl-2升高，Bax和cleaved-caspase-3明顯降低

6、。
　?、诶坠俣嘬战M、雷公藤內(nèi)酯組較空白組CyclinD1、CyclinE和Bcl-2均有降低，Bax和cleaved-caspase-3明顯升高;雷公藤多苷組較雷公藤內(nèi)酯組Bcl-2升高，Bax明顯降低，cleaved-caspase-3無明顯變化。
　　③白芍總苷組Bcl-2輕度升高，Bax和cleaved-caspase-3無明顯變化;
　　結(jié)論:
　　1.雷公藤內(nèi)酯能將MC3T3-E1細(xì)胞周期阻滯在G0