菟絲子黃酮、雷公藤多苷對(duì)原代培養(yǎng)幼鼠生精細(xì)胞增殖及凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過觀察含 GTW、菟絲子黃酮藥物血清對(duì)體外培養(yǎng)的原代大鼠睪丸生精細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的影響，探討菟絲子黃酮干預(yù)GTW所致生殖損傷的作用機(jī)制。本課題為國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目的一部分內(nèi)容。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠睪丸生精細(xì)胞，將其分為空白組、9mgGTW組（多苷1號(hào)組）、9mgGTW+菟絲子黃酮組（黃酮1號(hào)組）、12mgGTW組（多苷2號(hào)組）、12mgGTW+菟絲子黃酮組（黃酮2號(hào)組），加不同含藥血清，于培養(yǎng)24h、48h后

2、，通過MTT法檢測(cè)含藥血清對(duì)生精細(xì)胞增殖的影響；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)含藥血清對(duì)生精細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡的影響。
　　結(jié)果:
　　1.生精細(xì)胞體外培養(yǎng)情況:生精細(xì)胞附著于支持細(xì)胞表面共同生長(zhǎng)、分化持續(xù)3周；堿性磷酸酶顯色中，精原細(xì)胞表面或內(nèi)部可見藍(lán)紫色的NBT-formazan沉淀，其他細(xì)胞中未見；Feulgen染色中，生精細(xì)胞呈圓形或橢圓形，胞核大，占據(jù)整個(gè)細(xì)胞體積的90％。
　　2.含藥血清對(duì)幼年大鼠睪丸生精細(xì)胞增殖的影

3、響
　　2.1作用24h各含藥血清組相比較
　?。?）多苷1號(hào)組及多苷2號(hào)組OD值明顯低于空白組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著差異；
　?。?）多苷1號(hào)組OD值稍低于多苷2號(hào)組，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　　（3）黃酮1號(hào)組 OD值明顯高于多苷1號(hào)組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著差異；黃酮2號(hào)組OD值高于多苷2號(hào)組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示菟絲子黃酮可拮抗GTW對(duì)生精細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　2.2作用48h各含藥血清組相比較
　

4、?。?）空白組OD值明顯高于多苷1號(hào)組；多苷2號(hào)組OD值低于空白組；
　?。?）黃酮1號(hào)組 OD值明顯高于多苷1號(hào)組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著差異；黃酮2號(hào)組OD值高于多苷2號(hào)組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示菟絲子黃酮可對(duì)抗GTW對(duì)生精細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　2.3各組48hOD值較24h均有不同程度的增長(zhǎng)，其中多苷1號(hào)組和多苷2號(hào)組增長(zhǎng)幅度較大。
　　3.含藥血清對(duì)幼年大鼠睪丸生精細(xì)胞細(xì)胞周期的影響
　　3.1在細(xì)胞倍體百分

5、比中
　?。?）空白組單倍體百分比高于多苷1號(hào)組和多苷2號(hào)組，而二倍體及四倍體百分比低于多苷1號(hào)組和多苷2號(hào)組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著差異。
　?。?）多苷1號(hào)組的單倍體和二倍體百分比高于多苷2號(hào)組，而四倍體百分比低于多苷2號(hào)組，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　（3）黃酮1號(hào)組單倍體百分比明顯高于多苷1號(hào)組，其二倍體及四倍體百分比低于多苷1號(hào)組；黃酮2號(hào)組單倍體百分比高于多苷2號(hào)組，其二倍體百分比低于多苷2號(hào)組，四倍體百分比低于多

6、苷2號(hào)組。提示菟絲子黃酮可以對(duì)抗 GTW對(duì)大鼠睪丸生精功能的抑制作用。
　　3.2在細(xì)胞倍體間比率中
　?。?）多苷1號(hào)組及多苷2號(hào)組在1C:4C和1C:2C中均明顯低于空白組。
　?。?）在1C:2C中，多苷1號(hào)組明顯高于多苷2號(hào)組。黃酮1號(hào)組稍高于多苷1號(hào)組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著差異，黃酮2號(hào)組明顯高于多苷2號(hào)組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　?。?）在4C:2C中，各組間比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.3在各

7、組間S期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的比較中：空白組高于多苷1號(hào)組及多苷2號(hào)組；多苷1號(hào)組稍低于多苷2號(hào)組及黃酮1號(hào)組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異；多苷2號(hào)組低于黃酮2號(hào)組，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示GTW作用后，細(xì)胞S期生精細(xì)胞數(shù)量明顯減少。
　　4.含藥血清對(duì)幼年大鼠睪丸生精細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響:與空白組相比，多苷1號(hào)組和多苷2號(hào)組細(xì)胞凋亡比率均升高；多苷1號(hào)組細(xì)胞凋亡比率稍低于多苷2號(hào)組，統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著差異；黃酮1號(hào)組細(xì)胞凋亡比率稍低于多苷1號(hào)組；黃酮2號(hào)