格列苯脲在高糖環(huán)境下對小鼠胚胎成骨細(xì)胞株MC3T3-E1增殖、分化及凋亡的影響.pdf

1、背景和目的:
　　近年來磺脲類降糖藥對骨質(zhì)疏松的影響引起越來越多學(xué)者的關(guān)注。多項大型臨床研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用不同降糖藥物的患者骨折的發(fā)生率有顯著差異，其中應(yīng)用噻唑烷二酮類藥物者骨折的發(fā)生率最高，胰島素次之，再其次為二甲雙胍，骨折發(fā)生率最低的是應(yīng)用磺脲類降糖藥的患者[1-3]。也有部分研究發(fā)現(xiàn)磺脲類藥物與骨折的發(fā)生無明顯相關(guān)性[4-6]，最近統(tǒng)計結(jié)果顯示，服用不同劑量磺脲類藥物的患者骨折風(fēng)險反而增加，顯著高于二甲雙胍組[7-8]。關(guān)于磺脲

2、類降糖藥對骨改建的影響，尚未見國外相關(guān)研究，而國內(nèi)馬攀等人[9-11]報道：磺脲類降糖藥格列美脲可以在高糖環(huán)境下通過上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-1(GLUT-1)和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-4(GLUT-4）的表達(dá)來促進(jìn)大鼠下頜骨成骨細(xì)胞攝取葡萄糖，并通過磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt)通路直接促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖和分化，并且可以提高堿性磷酸酶（ALP)的活性以及增加I型膠原蛋白（COL-1）和骨鈣素（OCN）mRNA表達(dá)水平。格列吡嗪

3、和格列喹酮能夠促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖和I型膠原蛋白的表達(dá)，抑制其凋亡[12-13]。格列苯脲作為第二代磺脲類降糖藥具有強大的降糖作用，臨床應(yīng)用廣泛，且格列苯脲在國外常用于糖尿病合并妊娠的患者。本實驗主要探討不同濃度的格列苯脲在高糖環(huán)境下（16.5mmol/l）對體外培養(yǎng)的小鼠胚胎成骨細(xì)胞株MC3T3-E1增殖、分化及凋亡的影響。
　　方法:
　　經(jīng)不同濃度格列苯脲干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞48小時后，CCK-8比色法被

4、用來檢測MC3T3-E1細(xì)胞的增殖率，應(yīng)用實時熒光定量PCR（RT-q PCR)檢測分化相關(guān)標(biāo)志物 I型膠原蛋白（COL-1）和骨橋蛋白（OPN)的表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)被用來檢測細(xì)胞的凋亡率，利用Western blot法檢測凋亡蛋白（Bax）和抗凋亡蛋白（Bcl-2）的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8比色法與對照組相比，隨著格列苯脲濃度的升高，MC3T3-E1細(xì)胞的增殖率逐漸上升，即1μmol/l格列苯脲組，10μm

5、ol/l格列苯脲組和20μmol/l格列苯脲組與對照組相比增殖率依次增加了13.1％、24.2%和31.3%，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05）。
　　2.實時熒光定量PCR研究顯示，與對照組相比，COL-1、OPN mRNA的表達(dá)量隨著一定范圍內(nèi)格列苯脲濃度（1μmol/l，10μmol/l，20μmol/l）的升高而增加(P<0.05）。
　　3.流式細(xì)胞檢測術(shù) MC3T3-E1細(xì)胞的早期凋亡率隨著格列苯脲濃度的升高

6、而逐漸下降，即對照組、1μmol/l格列苯脲組，10μmol/l格列苯脲組，20μmol/l格列苯脲組的早期凋亡率依次為19.63%，11.20%，7.9%，4.7%，各組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05）。
　　4.Western Blot與對照組相比，隨著格列苯脲濃度的增加，Bcl-2蛋白逐步高表達(dá)， Bax蛋白的表達(dá)逐步下降,即 Bcl-2/Bax的值呈逐步增大的趨勢(P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　格列