豬胎盤肽凍干粉的制備及功效考察.pdf

1、豬胎盤(Pig Placenta)是富含多種生物活性成分的優(yōu)質(zhì)動(dòng)物藥資源，具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)免疫力、防治阿爾茲海默癥、抗氧化、增強(qiáng)記憶力等功效，但目前常被廢棄，有關(guān)豬胎盤的研究鮮見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以豬胎盤為原料，利用組織勻漿、反復(fù)凍融相結(jié)合的方法提取豬胎盤肽，優(yōu)化豬胎盤肽凍干粉制備工藝及功效評(píng)價(jià)，旨在為豬胎盤肽的充分合理利用提供科學(xué)依據(jù)。具體研究內(nèi)容如下:
　　1.豬胎盤肽的提取和分析
　　利用組織勻漿、反復(fù)凍融相結(jié)合的方法提

2、取豬胎盤成分，并鑒別其基本性質(zhì)，采用SDS-PAGE電泳方法鑒別豬胎盤肽，建立RP-HPLC色譜條件分析豬胎盤提取物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為豬胎盤提取液為微黃色透明液體，其pH為6.70;電泳結(jié)果:豬胎盤提取液含有相對(duì)分子量為74.4 kDa，61.16 kDa，43.39 kDa，14.52 kDa分子肽;提取液多肽含量為6.050mg.ml-1;在200～600 nm范圍內(nèi)在260.5 nm處有最大吸收峰。RP-HPLC色譜條件:色譜柱:Sym

3、metryC18(5μm，4.6×250 mm);流動(dòng)相:60％乙腈-水，梯度洗脫:乙腈:0～15min10％～20％，15～20 min20％～25％;柱溫:25℃;流速:0.5 ml.min-1;檢測波長:260.5 nm;進(jìn)樣量:10μl，RP-HPLC分析呈現(xiàn)12個(gè)峰，初步認(rèn)定含有人血白蛋白、免疫球蛋白、免疫調(diào)節(jié)因子、羊胎盤肽等功效成分。
　　2.豬胎盤肽凍干粉的制備及穩(wěn)定性考察
　　以外觀、復(fù)水性、多肽含量為考察指

4、標(biāo)，通過單因素考察，確定最佳凍干保護(hù)劑為4％蔗糖，凍干時(shí)間為30 h，藥液體積為3 ml。以多肽含量為考察指標(biāo)，對(duì)凍干保護(hù)劑濃度、凍干時(shí)間、藥液體積三種因素進(jìn)行星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化工藝，確定對(duì)豬胎盤肽多肽含量影響程度大小順序?yàn)樗幰后w積＞蔗糖濃度＞凍干時(shí)間，最佳工藝為4.35％蔗糖、凍干時(shí)間為30h、藥液體積為3.41 ml，此時(shí)多肽含量最大，為6.05016 mg.ml-1。經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，豬胎盤肽凍干粉在高溫高濕和光照條件下不穩(wěn)定，所

5、以要密封干燥低溫避光保存。
　　3.豬胎盤肽功效考察
　　測定豬胎盤肽凍干粉體外清除DPPH·自由基、超氧陰離子自由基(O2-)、羥基自由基（·OH-）的活性，結(jié)果表明豬胎盤肽凍干粉具有清除DPPH·、O2-、·OH-活性，且清除自由基活性與維生素C清除自由基活性相當(dāng)。
　　豬胎盤肽凍干粉作用于經(jīng)過D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠，給藥后每周末稱量小鼠體重;停藥前一周采用Morris水迷宮法檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。第六周末處死小

6、鼠，以皮膚含水率及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羥脯氨酸(Hyp)的含量為考察指標(biāo)，并觀察病理切片。結(jié)果表明:與正常組相比，模型組小鼠逃避潛伏期明顯延長，小鼠在平臺(tái)象限內(nèi)停留時(shí)間、停留時(shí)間百分比、穿越平臺(tái)次數(shù)均減少(P＜0.05);小鼠體重、皮膚含水率、SOD含量、Hyp含量降低(P＜0.01，P＜0.05)，MDA含量升高(P＜0.01，P＜0.05)，病理檢查結(jié)果為皮膚表皮不規(guī)則，真皮皺縮，膠原纖維排列紊亂;豬胎盤肽經(jīng)