生防菌水劑和凍干粉劑的制備及保存技術(shù)研究.pdf

1、近年來，越來越多不同種屬的生防細菌在生物防治上發(fā)揮巨大的開發(fā)潛力。但由于生防菌的保存受到各種環(huán)境因素的影響，給生物源農(nóng)藥的實際應(yīng)用帶來很大的不便。本文選擇了由本實驗室分離篩選得到的幾株分別來自芽孢桿菌屬，假單胞菌屬和泛菌屬的生防菌為研究對象，對影響利用冷凍干燥方法制備不同屬生防菌粉劑存活率的相關(guān)因素進行了研究，同時還對生防菌水劑使用和保存中的活菌濃度進行了探討。
　　本文首先研究了在冷凍干燥方法中不同保護劑和再水化劑對生防菌成團泛

2、菌菌株YT11保護作用的差異，以及不同保存溫度對YT11貯藏穩(wěn)定性和生防活力的影響，探討冷凍干燥方法制備生防菌粉劑的可行性。結(jié)果表明，5％蔗糖是最佳的保護劑，冷凍干燥后可以使YT11菌株在室溫25℃條件下存活率達90％以上。以5％蔗糖作保護劑時，5％脫脂奶粉為最佳的再水化劑，室溫25℃條件下復(fù)蘇再水化使YT11菌株復(fù)蘇率達100％。進一步的貯藏試驗結(jié)果表明，4℃貯存的冷凍干燥粉劑的活菌存活率顯著高于22℃下保存的活菌存活率。對保存24周

3、后的菌劑進行溫室生防試驗，結(jié)果顯示，4℃和22℃條件下保存的菌劑對番茄青枯病的防效分別達到71.57％和50.98％。證明了冷凍干燥方法可以制備有效生防菌YT11粉劑。
　　為了進一步研究冷凍干燥方法對制備其他不同屬生防菌劑的可行性，本文又研究比較了不同冷凍干燥保護劑和再水化劑對生防菌株芽孢桿菌AR156、假單胞菌2R37和泛菌2Re40的保護作用及復(fù)蘇能力的差異，并對后期在室溫貯藏下各菌株冷凍干燥粉劑的存活穩(wěn)定性進行了檢測。試驗

4、結(jié)果顯示，不同的細菌與不同的保護劑之間存在一定的選擇配伍性。5％纖維二糖和5％D-半乳糖在冷凍干燥中分別對2R37和2Re40表現(xiàn)最好的保護效果，冷凍干燥后室溫25℃條件下檢測細菌存活率分別為98.01％和54.31％。AR156在保護劑5％蔗糖的作用下存活率接近100％。用10％的脫脂奶粉作再水化劑，室溫下水化生防菌粉劑可以使三個生防菌復(fù)蘇率達到最佳水平。在后期室溫保存中(25℃)，AR156冷凍干燥粉劑保存活力明顯好于2Re40和2

5、R37，保存12個月AR156存活率保持在50％以上，而2R37和2Re40粉劑活力只能維持3個月。
　　目前國內(nèi)的生防菌劑型中水劑還是最廣泛的劑型之一，影響生防菌水劑貨架期和生防效果的因素中，活菌濃度是最主要和基本的，因此本文還研究了不同濃度的3株生防菌芽孢桿菌AR156、泛菌YT11和假單胞菌ABc9對番茄青枯病的溫室防效測定，同時對保存36周后的水劑進行了活性跟蹤和防效評價，研究了三株來自不同屬的生防細菌水劑生防作用的發(fā)揮及

6、水劑保存所需的最佳活菌濃度。試驗結(jié)果表明，生防菌的防效與其使用的濃度在106-109CFU/ml范圍內(nèi)為正相關(guān)，使用的濃度高于109CFU/ml時，生防效果反而下降;當AR156濃度為108CFU/ml，YT11濃度為108CFU/ml，ABe9濃度為109CFU/ml時對番茄青枯病的生防效果最佳，分別為63.06％，49.55％，52.25％。起始保存濃度越高生防菌存活率下降越快。AR156和ABe9的最佳起始保存濃度為109CFU/

7、ml，YT11的最佳起始保存濃度為108CFU/ml。
　　綜上所述，實驗表明了以5％蔗糖為保護劑、5％脫脂奶粉為再水化劑制備成團泛菌菌株YT11冷凍干燥粉劑，并于4℃貯存，可以成功制備保持有效生防效果的YT11生防菌劑。本研究還比較了來自三個不同屬的生防菌使用冷凍干燥方法制備粉劑對其存活率的影響，進一步表明不同屬生防菌在對冷凍干燥的敏感性，以及使用的保護劑和再水化劑都存在一定的差異。本文還說明生防菌的生防效果與使用的活菌濃度并不