HCN1-2通道亞型在慢性腦缺血所致認(rèn)知障礙中的作用及藥物干預(yù)研究.pdf

1、本文從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分：大鼠慢性腦缺血不同時(shí)間點(diǎn)引起的空間學(xué)習(xí)記憶障礙與海馬CA1區(qū)HCN1/HCN2膜表達(dá)動態(tài)變化特征。
　　目的：慢性腦缺血（Chronic cerebral hypoperfusion，CCH）是臨床上常見的一種病理狀態(tài)，其引起認(rèn)知損傷的機(jī)制特別是隨時(shí)間變化的機(jī)制目前還不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在研究大鼠慢性腦缺血后其認(rèn)知表現(xiàn)與海馬CA1區(qū)HCN1/HCN2之間的動態(tài)變化特征，為缺血后認(rèn)知損傷的

2、干預(yù)提供一個(gè)新的作用靶點(diǎn)。
　　方法：大鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎（Two-vessel occlusion，2VO）建立慢性腦缺血模型。實(shí)驗(yàn)分為假手術(shù)4W，8W及12W組，缺血4W，8W及12W組。各組大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能用水迷宮（Morris water maze，MWM）實(shí)驗(yàn)評價(jià)，電生理長時(shí)程增強(qiáng)（Long-term potentiation，LTP）闡明其突觸機(jī)制。NeuN，HCN1及HCN2的表達(dá)采用免疫組化和Western

3、bloting進(jìn)行分析評價(jià)。
　　結(jié)果：慢性腦缺血能引起穩(wěn)定的空間學(xué)習(xí)記憶損傷，其損傷程度與缺血時(shí)間無明顯相關(guān)性。慢性腦缺血后神經(jīng)元丟失只出現(xiàn)在缺血4W，隨著缺血時(shí)間的延長（8W和12W）其神經(jīng)元的丟失得到恢復(fù)。在慢性腦缺血4W時(shí)，海馬CA1區(qū)HCN1的膜表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)，HCN2的膜表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)。但在缺血的延長期（8W和12W）只出現(xiàn)HCN2的膜表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：大鼠慢性腦缺血后海馬CA1區(qū)HCN1/HCN2的膜表達(dá)紊亂是

4、造成其空間學(xué)習(xí)記憶損傷的一個(gè)重要原因。并且在缺血的延長期（8W和12W）其空間學(xué)習(xí)記憶損傷主要由HCN2的膜表達(dá)上調(diào)所致。
　　第二部分：氟西汀通過下調(diào)海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達(dá)從而改善大鼠慢性腦缺血引起的認(rèn)知障礙。
　　目的：我們之前的研究發(fā)現(xiàn)在慢性腦缺血的延長期，海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達(dá)上調(diào)是造成大鼠出現(xiàn)認(rèn)知障礙的一個(gè)主要原因。所以本實(shí)驗(yàn)旨在探討氟西汀干預(yù)后能否改善大鼠慢性腦缺血引起的認(rèn)知障礙，以及其所涉及的機(jī)制是

5、否與 HCN2有關(guān)。
　　方法：2VO手術(shù)建立慢性腦缺血模型。實(shí)驗(yàn)分為假手術(shù)組，缺血模型組，缺血+氟西汀給藥組。在造模后第2周開始給予氟西?。?0mg/kg,ig），持續(xù)給藥6周。在造模后第8周時(shí)各組大鼠的認(rèn)知功能由水迷宮實(shí)驗(yàn)和新事物認(rèn)知（novel objects recognition，NOR）實(shí)驗(yàn)評價(jià)。電生理LTP的記錄闡明其學(xué)習(xí)記憶的突觸機(jī)制。Western bloting評價(jià)大鼠海馬CA1區(qū)HCN2的蛋白水平。
　

6、　結(jié)果：氟西汀能顯著改善慢性腦缺血引起的認(rèn)知障礙，并逆轉(zhuǎn)由缺血引起的海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：氟西汀能通過下調(diào)海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達(dá)，從而改善慢性腦缺血所致的認(rèn)知障礙。
　　第三部分：巴氯芬通過上調(diào)前額皮層HCN2的表達(dá)從而改善由慢性腦缺血引起的空間工作記憶損傷。
　　目的：慢性腦缺血能導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶損傷并通過多種生物學(xué)途徑增加血管性癡呆的患病風(fēng)險(xiǎn)。然而，慢性腦缺血能否導(dǎo)致前額皮層（prefro

7、ntal cortex，PFC）依賴性的空間工作記憶損傷以及GABAB受體激動劑巴氯芬能否改善這種損傷，目前還不清楚。因此，本研究旨在探討巴氯芬能否改善慢性腦缺血后的空間工作記憶障礙以及其涉及的機(jī)制。
　　方法：采用2VO手段建立慢性腦缺血模型。在缺血后兩周給予巴氯酚（25mg/kg，i.p.），持續(xù)給藥三周?？臻g工作記憶采用改進(jìn)的水迷宮實(shí)驗(yàn)，即一種延遲位置匹配（delayed matching-to-place, DMP）方法來

8、評價(jià)。Western bloting以及免疫熒光分別評價(jià)蛋白水平與蛋白定位。
　　結(jié)果：慢性腦缺血能導(dǎo)致顯著的空間工作記憶損傷，同時(shí)伴隨著PFC中HCN2的表達(dá)下調(diào)，但HCN1沒有發(fā)生變化。并且在慢性腦缺血后，PFC中神經(jīng)元特異性標(biāo)記物蛋白基因產(chǎn)物9.5（protein gene product9.5，PGP9.5），星形膠質(zhì)細(xì)胞（glial fibrillary acidic protein，GFAP），突觸素（synaptop

9、hysin，SYP），腦源性營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BNNF），以及小清蛋白（parvalbumin，PV）陽性中間神經(jīng)元的表達(dá)也沒有發(fā)生改變。給予巴氯酚后能顯著改善由慢性腦缺血引起的空間工作記憶損傷，同時(shí)能逆轉(zhuǎn)HCN2表達(dá)的下調(diào)。此外，結(jié)果還顯示在PFC中HCN2與PV陽性中間神經(jīng)元存在共表達(dá)。
　　結(jié)論：慢性腦缺血能引起空間工作記憶損傷，給予巴氯酚后能通過逆轉(zhuǎn)PFC中HCN