CpG-ODN對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24的作用以及與化療藥聯(lián)用的藥效研究.pdf

1、目的：
　　作為泌尿系統(tǒng)中常見(jiàn)的腫瘤疾病之一，膀胱癌的發(fā)病率近年來(lái)呈現(xiàn)逐漸增長(zhǎng)的趨勢(shì)。先前的有關(guān)數(shù)據(jù)表明，一種具有特定結(jié)構(gòu)的寡聚脫氧核苷酸（CpG-ODN）對(duì)某些腫瘤疾病具有潛在的治療效果。本實(shí)驗(yàn)中，我們主要研究這種特定結(jié)構(gòu)的CpG-ODN對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24的影響及相關(guān)作用機(jī)制；同時(shí)，評(píng)價(jià)CpG-ODN與化療藥聯(lián)用對(duì)藥效的影響，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)T24細(xì)胞，采用MTS法檢測(cè)CpG-OD

2、N及其脂質(zhì)體對(duì)T24細(xì)胞的體外抑制作用，并探討劑量-時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，同時(shí)對(duì)比CpG-ODN與卡介苗單獨(dú)作用的效果以及脂質(zhì)體包裹與否對(duì)抑制作用的影響；此外可以通過(guò)Real-time PCR法檢測(cè)T24細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2在CpG-ODN及其脂質(zhì)體作用后的表達(dá)變化。
　　CpG-ODN與阿霉素（DOX）或五氟尿嘧啶（5-FU）單獨(dú)或聯(lián)合體外作用于T24細(xì)胞，采用MTS、Hoechst33258、以及流式細(xì)胞儀等方法分別檢測(cè)細(xì)胞活

3、性，觀察細(xì)胞核的形態(tài)變化，分析T24細(xì)胞的凋亡和周期分布情況，再通過(guò)Real-time PCR法分析細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　CpG-ODN能夠有效遏制T24細(xì)胞的體外活性，并且呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性，其單獨(dú)作用的效果也強(qiáng)于卡介苗，而脂質(zhì)體包裹的CpG-ODN能夠更加顯著的抑制T24細(xì)胞的體外活性。Real-time PCR則檢測(cè)到在CpG-ODN及其脂質(zhì)體的作用下，T24細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2

4、 mRNA的表達(dá)都有所下調(diào)，并且脂質(zhì)體組下調(diào)效果更顯著。Bcl-2家族抗凋亡因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，Bcl-2的表達(dá)下調(diào)也可以刺激相關(guān)藥物作用于腫瘤細(xì)胞，引起凋亡的發(fā)生。
　　CpG-ODN和DOX單獨(dú)作用都可以降低T24細(xì)胞的活性，聯(lián)用后對(duì)T24的活性抑制作用減弱。而CpG-ODN與5-FU聯(lián)用后，對(duì)T24細(xì)胞的體外活性抑制效果強(qiáng)于二者單獨(dú)作用，并可以進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯于S期，同時(shí)抗凋亡因子Bcl-2 m

5、RNA的表達(dá)量更少。
　　結(jié)論：
　　CpG-ODN能夠有效降低T24細(xì)胞的體外活性，原因之一是下調(diào)抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)從而減少細(xì)胞增殖。脂質(zhì)體包裹的CpG-ODN抑制作用更強(qiáng)。CpG-ODN并非是所有化療藥的增敏劑，與DOX聯(lián)用后效果低于DOX單獨(dú)使用，而與5-FU聯(lián)用則產(chǎn)生促進(jìn)作用，能夠進(jìn)一步誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡，影響細(xì)胞周期，并顯著下調(diào)Bcl-2的表達(dá)。綜合看來(lái)，CpG-ODN有望成為治療膀胱癌的新型小分子核酸藥物