Survivin在人膀胱癌T24細(xì)胞化療凋亡過程中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:survivin是近年來發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白（IAP）家族中的新成員，是目前發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子，并且survivin廣泛高表達(dá)于人類大多數(shù)惡性腫瘤組織中，在正常組織很少表達(dá)或不表達(dá)。有研究表明，該因子通過抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，在腫瘤的形成和發(fā)展中起著重要的作用。本研究通過使用不同濃度化療藥物吡柔比星(Pirarubicin，THP)作用人膀胱癌T24細(xì)胞一定時間后，檢測T24細(xì)胞的細(xì)胞增殖情況，并檢測Survivin mRNA和S

2、urvivin蛋白在不同濃度化療藥物作用下細(xì)胞中的表達(dá)水平，探討Survivin在THP誘導(dǎo)人膀胱癌T24細(xì)胞凋亡過程中的作用機(jī)制和原理，為吡柔比星在臨床上膀胱癌的灌注治療中提供一定的理論依據(jù)，并為膀胱癌的發(fā)生發(fā)展以及分子靶向治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:1.配置成不同終濃度的THP(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)，分別作用于人膀胱癌T24細(xì)胞一定時間，在設(shè)置空白對照組以及各藥物實驗組的前提下

3、，應(yīng)用MTT法檢測不同濃度THP對人膀胱癌T24細(xì)胞分別作用24、48、72小時后增殖抑制率的影響。2.應(yīng)用RT-PCR方法檢測在不同濃度(0、0.1、1、10μg/ml)THP處理膀胱癌T24細(xì)胞24小時后，T24細(xì)胞中SurvivinmRNA的表達(dá)水平。3.應(yīng)用Western-blot蛋白印跡技術(shù)檢測人膀胱癌T24細(xì)胞在不同濃度(0、0.1、1、10μg/ml)THP處理24小時后，T24細(xì)胞中Survivin蛋白的表達(dá)水平變化。應(yīng)

4、用SPSS.13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)差”(X±s)表示。兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多樣本均數(shù)比較采用完全隨機(jī)的單因素(One-ANOVA)方差分析。P＜0.05表示具有差異，有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01表示差異顯著。
　　結(jié)果:1.經(jīng)MTT法檢測空白組、24h，48h，72h四組細(xì)胞在藥物作用后各組的OD值，根據(jù)測得的OD值，比較各組細(xì)胞生長情況。與對照組比較，各組濃度的THP在24h，48h，72h均可以

5、抑制膀胱癌T24細(xì)胞的增殖，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，計算加入藥物組24h，48h，72h增殖抑制率，發(fā)現(xiàn)其抑制率呈現(xiàn)一定的濃度及時間依賴性(P＜0.05)。2.不同濃度(0、0.1、1、10μg/ml)THP處理T24細(xì)胞24小時后，均使Survivin mRNA的表達(dá)明顯下調(diào)，并表現(xiàn)為一定的濃度依賴性(P＜0.01)。3.應(yīng)用western-blot檢測不同濃度THP作用膀胱癌T24細(xì)胞24小時后，各組不同濃度間Survi

6、vin蛋白質(zhì)的表達(dá)顯著下調(diào)，并且具有一定的濃度依賴性，隨著藥物濃度的升高，Survivin蛋白下調(diào)的更加明顯，表現(xiàn)出一定范圍的濃度依賴性(P＜0.05)。
　　結(jié)論:吡柔比星在體外的細(xì)胞實驗中，對膀胱癌T24細(xì)胞有明顯的抑制作用，并且具有一定的濃度和時間依賴性。即隨著THP濃度的升高和作用時間的延長，吡柔比星對T24細(xì)胞的抑制作用更加明顯。在THP對膀胱癌T24細(xì)胞的體外抑制實驗中，survivin mRNA和survivin蛋白