苯扎溴銨對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞抑制作用的體外研究.pdf

1、目的：研究苯扎溴銨對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞體外增殖、周期的影響及凋亡的誘導(dǎo)作用，為進(jìn)一步研究其抗腫瘤作用機(jī)制和臨床應(yīng)用于膀胱癌的腔內(nèi)灌注治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：1.采用MTT法以20μg/ml絲裂霉素C(MMC)作陽(yáng)性對(duì)照，觀察不同濃度的苯扎溴銨（0，0.1，0.5，1，5，10，100，1000μg/ml）作用不同時(shí)間(24h，48h，72h)對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖的抑制作用;2.收集不同濃度的苯扎溴銨（0，0.5，1，

2、5，10μg/ml）作用24h的T24細(xì)胞，經(jīng)碘化丙啶(PI)單染后流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期的分布;3.倒置相差顯微鏡下觀察不同濃度的苯扎溴銨作用不同時(shí)間(24h，48h，72h)，人膀胱癌T24細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;4.采用流式細(xì)胞（AnnexinV/PI雙染）技術(shù)分析不同濃度苯扎溴銨作用24h，對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。
　　 結(jié)果：1.苯扎溴銨抑制人膀胱癌T24細(xì)胞的增殖:MTT結(jié)果示，不同濃度苯扎溴銨(0.

3、1～1000μg/ml)作用人膀胱癌T24細(xì)胞24h，抑制率為5.30％～97.17％，呈劑量依賴性增大;各濃度組抑制率與陰性對(duì)照組比較，除0.1μg/ml濃度組外，余均有顯著性差異(P＜0.01);苯扎溴銨各濃度組對(duì)T24細(xì)胞增殖抑制率與MMC組抑制率(22.84％)比較，差異均有顯著性(P＜0.01)，其中5μg/ml濃度組抑制率為27.7％，與MMC組抑制效果差異的實(shí)際意義不大;不同濃度組苯扎溴銨隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)(48～72

4、h)，抑制率范圍分別升至10.86％～97％和29.27％～99％，呈時(shí)間依賴性。2.流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度苯扎溴銨(0.5～10μg/ml)作用24h后的T24細(xì)胞周期結(jié)果顯示，處于G2/M期的細(xì)胞比例隨藥物濃度升高而增多，分別為12.97％～44.64％，除0.5μg/ml濃度組外，其余各組較陰性對(duì)照組8.81％均有顯著性差異(P＜0.05)，較MMC組的12.03％也有顯著性差異(P＜0.05)。3.倒置相差顯微鏡下觀察結(jié)果示，當(dāng)

5、苯扎溴銨濃度≤10μg/ml作用24h，可見(jiàn)典型的凋亡細(xì)胞;當(dāng)濃度≥100μg/ml時(shí)，見(jiàn)大量壞死細(xì)胞。4.流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度苯扎溴銨（0.5～10μg/ml）作用24h后的T24細(xì)胞凋亡結(jié)果示，早期凋亡率分別為6.25％～24.43％，總的凋亡率分別為12.12％～50.72％，呈劑量依賴性升高;與陰性對(duì)照組1.63％及2.70％相比均有顯著性差異(P＜0.05)，與MMC組18.40％及24.95％比較，除5μg/ml濃度組外(

6、P=0.091)，其余各組均有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1.苯扎溴銨在體外可以明顯抑制人膀胱癌T24細(xì)胞的增殖，其抑制作用呈明顯的劑量和時(shí)間依賴性。2.不同濃度苯扎溴銨（0.5～10μg/ml）在體外作用人膀胱癌T24細(xì)胞，引起細(xì)胞周期G2/M期阻滯，呈劑量依賴性。3.高濃度苯扎溴銨(≥100μg/ml)在體外可直接導(dǎo)致人膀胱癌T24細(xì)胞壞死，低濃度(0.5～10μg/ml)則誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，其凋亡誘導(dǎo)作用呈時(shí)