旋轉(zhuǎn)手法對早期動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響.pdf

1、背景:
　　頸動脈粥樣硬化斑塊是由于脂肪、血栓、結(jié)締組織和碳酸鈣在頸動脈沉積所造成的一種對人體有害的狀態(tài)，是一種多種危險因素所致的進(jìn)行性動脈血管疾病病理表現(xiàn)，常會因局部缺血而引發(fā)腦梗死等嚴(yán)重后果。隨著生活水平的提高，高脂血癥、高血壓、糖尿病、吸煙、肥胖與日俱增，尤其以中老年居多，而這些都是目前認(rèn)為引發(fā)動脈粥樣硬化疾病的重要危險因素。與此同時，中老年患者也是頸部疾患的高發(fā)人群，常見的包括頸椎病、頸椎間盤突出癥、頸椎關(guān)節(jié)紊亂等。鑒于手

2、法治療對緩解頸部疼痛或不適的顯著療效，以及患者對口服藥物的副作用的顧慮，該人群患者往往會將頸椎旋轉(zhuǎn)手法等物理治療方式作為首選。據(jù)統(tǒng)計，在美國每年約有8百萬人因頸部疼痛求醫(yī)，而其中1百萬人會選擇推拿治療，但接踵而至的，一方面是對手法療效的認(rèn)可，另一方面卻是關(guān)于手法治療不當(dāng)造成頸部疾患不良事件報道。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，1995年美國因頸部推拿造成腦血管損傷的事故占全部推拿事故的6.2％。這些層出不窮的不良事件（包括缺血性腦卒中、腦梗死等）以及其高

3、致死率不可避免的引起了相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜液团R床醫(yī)生的高度重視，頸部推拿手法對頸動脈粥樣硬化疾病患者的影響也隨之成為學(xué)科界專家關(guān)注的焦點(diǎn)之一。頸動脈粥樣硬化頸動脈斑塊所致官腔狹窄、血流動力學(xué)改變及斑塊脫落形成栓子是引起腦缺血的主要機(jī)制。其中，大部分缺血性腦卒中及腦梗死的患者與頸動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)。動脈斑塊按病理變化可分為兩類:穩(wěn)定性斑塊和不穩(wěn)定型斑塊，后者較前者更易脫落，形成血栓，引發(fā)腦血管疾病的風(fēng)險更高，故頸部手法對不穩(wěn)定性動脈粥樣硬

4、化斑塊的影響也無疑成為當(dāng)前相關(guān)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。然而，頸動脈粥樣硬化是一個進(jìn)行性的疾病，隨著病情的進(jìn)展及各種因素的刺激，穩(wěn)定性斑塊有可能向不穩(wěn)定性動脈斑塊發(fā)展。那么，頸部手法是否會是刺激穩(wěn)定性斑塊向不穩(wěn)定性斑塊發(fā)展的重要因素是本研究要解釋的關(guān)鍵問題。
　　目的:
　　本研究主要包括兩個方面:1、通過測量頸部旋轉(zhuǎn)手法和推橋弓法作用后的頸動脈斑塊的破裂壓力值與對照組的相比較，以研究頸部推拿手法是否會造成斑塊物理結(jié)構(gòu)改變，使其穩(wěn)定性

5、降低;2、通過對比三組（普通飼料喂養(yǎng)組、頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、高脂飼料喂養(yǎng)B組）實(shí)驗(yàn)兔的頸動脈硬化斑塊的微區(qū)拉曼光譜，以研究穩(wěn)定性動脈斑塊的拉曼光譜特點(diǎn)以及頸部推拿手法是否會改變斑塊脂質(zhì)成分而影響動脈斑塊的穩(wěn)定性。
　　方法:
　　1、兔穩(wěn)定性動脈粥樣硬化斑塊模型建立及分組:
　　選購普通級健康純種雄性成年新西蘭兔40只，以普通飼料喂養(yǎng)15天后，將實(shí)驗(yàn)兔分為兩大組，其中隨機(jī)選取10只作為普通飼料喂養(yǎng)組，繼續(xù)以普通飼料喂養(yǎng)至1

6、8周。剩余30只作為高脂飼料喂養(yǎng)A組，改用高脂肪飼料喂養(yǎng)至14周。14周后，再將高脂飼料喂養(yǎng)A組的30只實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為3個小組，分別是:頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、推橋弓組和高脂肪飼料喂養(yǎng)B組，并繼續(xù)以高脂飼料喂養(yǎng)至18周。最后，納入手法干預(yù)及結(jié)果分析的實(shí)驗(yàn)兔被分為四個小組:普通飼料喂養(yǎng)組、頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、推橋弓組和高脂肪飼料喂養(yǎng)B組。
　　2、兔穩(wěn)定性動脈粥樣硬化斑塊模型評估
　　第一、兔血脂代謝的檢測
　　分別于6周、10周、

7、14周每次從高脂飼料喂養(yǎng)A組的實(shí)驗(yàn)兔中隨機(jī)選取8只兔進(jìn)行血液生化檢驗(yàn)。于抽血前1天下午，給待抽血的家兔禁食，次日清晨（空腹大于12h）從兔耳緣靜脈采集血液2.5mL。將其注入含有抗凝劑的普通試管中，靜置1h后，將試管置于離心機(jī)中進(jìn)行離心10min，速度為1500r/min。抽取上層血清，送至南方醫(yī)院檢驗(yàn)科，全自動生化儀測定血清中三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)，高密度脂蛋白(HDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)

8、含量。
　　第二、病理學(xué)觀察
　　分別于6周、10周、14周從高脂飼料喂養(yǎng)A組的實(shí)驗(yàn)兔中隨機(jī)選取1只處死，取頸動脈全長，縱行切開，將其置于4％的甲醛溶液中固定，逐級脫水，透明，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色，觀察病理變化。
　　第三、統(tǒng)計學(xué)方法
　　采用SPSS13.0軟件對實(shí)驗(yàn)兔的一般情況及血脂生化檢驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。兩組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組數(shù)據(jù)采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0.05為顯著性差異。<

9、br>　　3、手法干預(yù)
　　于14周時分別對頸椎旋轉(zhuǎn)手法組和推橋弓組的實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行相應(yīng)的手法干預(yù)。頸椎旋轉(zhuǎn)手法組將兔子頸部左右各旋轉(zhuǎn)1次（手法以將兔子頸部旋轉(zhuǎn)至極限即止），1次/3天，共15天，共5次;推橋弓組沿著左右頸動脈各推20次，1次/天，共15天，共15次。
　　4、頸部推拿手法對兔頸動脈粥樣硬化斑塊體外穩(wěn)定性分析
　　第一、分析裝置
　　1個壓力記錄裝置(SMC PRESSURE，ZSE30-01-65M

10、)，1個150ml注射器，1個三通管，3根壓力傳輸管，1根7號針頭，1對9V電池和1對電池夾。利用三通管和壓力傳輸管分別將注射器、壓力記錄裝置、7號針頭連接起來。電池夾與壓力記錄裝置電源線相連，正負(fù)極分別與電池正負(fù)極相連。通過注射器逐步加壓，將壓力通過壓力傳輸通道末端的針頭傳遞到斑塊內(nèi)，通過壓力記錄裝置記錄斑塊破裂時出現(xiàn)的最大壓力值。
　　第二、兔頸動脈粥樣硬化斑塊體外穩(wěn)定性分析
　　分別在三組頸動脈中取肉眼觀察向管腔內(nèi)突起

11、明顯的新鮮斑塊各8處，與血管外膜與管壁成大約30°方向進(jìn)針，根據(jù)進(jìn)針時的阻力變化和肉眼觀察，判斷針頭是否進(jìn)入斑塊部位內(nèi)膜下，在確定針尖進(jìn)入斑塊內(nèi)膜后，以15ml/s勻速推動注射器以加壓，記錄斑塊破裂時的壓力值。
　　第三、統(tǒng)計學(xué)方法
　　各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。以雙側(cè)α=0.05為顯著性差異。
　　

12、5、頸椎旋轉(zhuǎn)手法對頸動脈粥樣硬化區(qū)拉曼光譜特征的影響
　　第一、樣本處理
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束時處死動物，游離頸動脈，縱行切開，再將動脈放入PBS(pH7.4)溶液中，于-80℃冰箱保存，以備拉曼光譜測定。
　　第二、拉曼光譜檢測
　　檢測前解凍標(biāo)本，于取出的兩組動脈（頸椎旋轉(zhuǎn)手法組和高脂飼料喂養(yǎng)B組）中各選出6處具有較明顯的斑塊的動脈，普通飼料喂養(yǎng)組隨機(jī)選6條，生理鹽水洗凈，以633nm的激發(fā)作為激發(fā)光源，激光器輸出功

13、率:10.4mw，光斑直徑:1μm;各物質(zhì)光譜的拉曼位移范圍旋轉(zhuǎn)為1100～1900cm-1，信號被收集并校正，信號收集時間為15～60s。
　　第三、特征峰相對強(qiáng)度統(tǒng)計學(xué)分析
　　采用以零點(diǎn)為基數(shù)，運(yùn)用Origin6.0軟件算出每個特征峰（1450cm-1及1660cm-1處）信號的相對強(qiáng)度。計量資料運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對頸椎旋轉(zhuǎn)手法和高脂飼料喂養(yǎng)B組的拉曼光譜進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理，數(shù)據(jù)以x±S表示，兩兩之間的比較采

14、用T檢驗(yàn)。以P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)動物死亡數(shù)量
　　納入雄性成年新西蘭兔40只，喂養(yǎng)過程中死亡10只。其中，高脂飼料喂養(yǎng)A組中的30只實(shí)驗(yàn)兔中死亡5只。普通飼料喂養(yǎng)組的10只實(shí)驗(yàn)兔死亡5只。實(shí)驗(yàn)造模過程中，總存活率66.7％。最終納入分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析的兔總計30只。
　　2、頸動脈粥樣硬化兔血脂水平變化
　　6周、10周、14周時，高脂飼料喂養(yǎng)A組30只實(shí)驗(yàn)兔血清總膽固醇(T

15、C)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)水平呈逐步升高，高密度脂蛋白(HDL)水平呈逐步降低，各項(xiàng)指標(biāo)兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3、病理觀察結(jié)果
　　第6周，頸動脈病理切片示:內(nèi)膜完整而光滑，中膜平滑肌走行清晰，無增生;第10周，頸動脈病理切片示:動脈內(nèi)皮受損增生，凸向管腔，有泡沫細(xì)胞形成;第14周，頸動脈病理切片示:可見明顯泡沫細(xì)胞聚集，管腔可見明顯紅色血栓生成，符合動

16、脈粥樣硬化早期穩(wěn)定性動脈斑塊病變特點(diǎn)。
　　4、破裂壓力檢測結(jié)果
　　在壓力作用下斑塊發(fā)生破裂，肉眼可見加壓時斑塊部位發(fā)生凸起，持續(xù)加壓至一定值時凸起消失，同時壓力表所示壓力值降低，記錄斑塊破裂瞬間所示的最大壓力值。頸椎旋轉(zhuǎn)手法組、推橋弓組和高脂飼料喂養(yǎng)B組之間均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　5、旋轉(zhuǎn)手法組與高脂飼料喂養(yǎng)B組的拉曼光譜檢測
　　第一、旋轉(zhuǎn)手法組與對照組的拉曼光譜檢測
　　普通飼料喂養(yǎng)組

17、的拉曼光譜圖中，1450cm-1和1660cm-1處未見明顯脂質(zhì)特征峰;頸椎旋轉(zhuǎn)手法組的拉曼光譜圖中，1450cm-1和1660cm-1處可見明顯脂質(zhì)特征峰;高脂飼料喂養(yǎng)B組的拉曼光譜圖中，1450cm-1和1660cm-1處可見明顯脂質(zhì)特征峰。
　　第二、特征峰相對強(qiáng)度測量的結(jié)果
　　讀取頸椎旋轉(zhuǎn)手法組與高脂飼料喂養(yǎng)B組的譜線，將拉曼峰值和對應(yīng)的波長（相對強(qiáng)度）用SPSS13.0軟件進(jìn)行T驗(yàn)，兩組標(biāo)本在1450，1660n