三疣梭子蟹MyD88,TRAF6基因的克隆及在抗感染過程中的作用研究.pdf

1、Pt-MyD88和Pt-TRAF6是三疣梭子蟹Toll信號(hào)通路中關(guān)鍵接頭蛋白分子，在甲殼動(dòng)物先天免疫應(yīng)答反應(yīng)中起著重要的作用。本研究利用常規(guī) PCR和RACE技術(shù)首先獲得了三疣梭子蟹 Pt-MyD88和 Pt-TRAF6基因的cDNA全長(zhǎng)，Pt-MyD88全長(zhǎng)1736bp，開放閱碼框（ORF）長(zhǎng)1410bp編碼469個(gè)氨基酸，Pt-TRAF6全長(zhǎng)2251bp,ORF長(zhǎng)1800bp編碼599個(gè)氨基酸。對(duì)目的基因蛋白序列進(jìn)行同源性分析發(fā)現(xiàn)，

2、Pt-MyD88和 Pt-TRAF6與甲殼動(dòng)物相似性最高。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析Pt-MyD88和Pt-TRAF6在梭子蟹不同組織中的分布，結(jié)果顯示 Pt-MyD88在血，鰓，腸道，心臟表達(dá)量比較高，在肌肉中表達(dá)量最低，Pt-TRAF6在鰓和血中表達(dá)量較高，腸道，心臟，肌肉表達(dá)量較低。同時(shí)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)在不同溫度和鹽度脅迫條件下Pt-MyD88和Pt-TRAF6的表達(dá)量變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同溫度和鹽度下Pt-MyD88和Pt

3、-TRAF6的表達(dá)無顯著差異。用病原微生物假絲酵母菌，溶藻弧菌，WSSV及脂多糖（LPS）分別刺激健康梭子蟹，定量PCR檢測(cè)Pt-MyD88和Pt-TRAF6的表達(dá)量變化發(fā)現(xiàn)，Pt-MyD88在假絲酵母菌，溶藻弧菌和LPS刺激后，鰓中表達(dá)量顯著上調(diào)，WSSV刺激后，血中表達(dá)量顯著上調(diào)。溶藻弧菌，LPS，WSSV刺激后Pt-TRAF6在鰓中的表達(dá)量明顯上調(diào)，在血中則相反。說明Pt-MyD88和Pt-TRAF6確實(shí)在梭子蟹先天免疫應(yīng)答反應(yīng)中