金絲桃苷對(duì)Nrf2-ARE途徑的影響及其對(duì)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用.pdf

1、核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid-2-related factor2，Nrf2)通過作用于抗氧化蛋白啟動(dòng)子區(qū)域的抗氧化反應(yīng)元件(anti-oxidant response element，ARE)，發(fā)揮抗氧化應(yīng)激損傷作用。Nrf2-ARE是目前為止發(fā)現(xiàn)的最為重要的內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激信號(hào)通路。金絲桃苷(Hyperoside，Hyp)是廣泛存在于各種植物果實(shí)及全草中的一種重要天然產(chǎn)物，屬于黃酮醇苷化合物。

2、它具有廣泛的藥理活性，其機(jī)制主要為抗氧化。氧化應(yīng)激是酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、缺血再灌注肝損傷等肝臟疾病的主要發(fā)病機(jī)制。植物黃酮對(duì)肝臟疾病的防治多與其抗氧化作用有關(guān)。
　　目的：
　　本研究以缺氧或H2O2損傷的人肝細(xì)胞(L02)為模型，研究Hyp對(duì)氧化應(yīng)激損傷的L02細(xì)胞中Nrf2-ARE信號(hào)通路的影響，并探討其對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　方法：
　　離體培養(yǎng)L02細(xì)胞，設(shè)置正常對(duì)照組，缺氧模型組，H2O2模型

3、組及Hyp高、中、低劑量三個(gè)預(yù)處理組。細(xì)胞處理結(jié)束后，CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力，試劑盒檢測(cè)SOD活性和丙二醛(MDA)含量，流式細(xì)胞儀檢測(cè)活性氧(ROS)水平，探討Hyp對(duì)氧化應(yīng)激引起L02細(xì)胞損傷的預(yù)保護(hù)作用。隨后重新設(shè)置正常對(duì)照組，缺氧模型組，H2O2模型組，單獨(dú)Hyp處理組及Hyp預(yù)處理組。qRT-PCR法及Western blot法分析細(xì)胞保護(hù)蛋白血紅素加氧酶-1(HO-1)、超氧岐化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過

4、氧化物酶(GPx)及Nrf2、BTB-CNC異體同源蛋白-1(Bach1)、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1(Keap1)的基因和蛋白表達(dá)水平的變化，研究Hyp對(duì)氧化應(yīng)激損傷的L02細(xì)胞中Nrf2-ARE信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果：
　　缺氧或H2O2造成的氧化應(yīng)激會(huì)引起L02細(xì)胞活力和SOD活性明顯降低，MDA含量和ROS水平顯著升高。兩種方式Hyp預(yù)處理均明顯改善這些指標(biāo)，即削弱缺氧或H2O2引起的細(xì)胞活力與SOD等活

5、性降低、MDA含量與ROS水平升高，減弱缺氧或H2O2引起的氧化應(yīng)激損傷。qRT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，缺氧或H2O2造成的氧化應(yīng)激均引起細(xì)胞保護(hù)蛋白HO-1和轉(zhuǎn)錄因子Nrf2升高。氧化損傷前、后，用Hyp處理均可進(jìn)一步顯著增加細(xì)胞保護(hù)蛋白HO-1、SOD、CAT、GPx和轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的基因和蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)Nrf2向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，同時(shí)明顯下調(diào)Bach1相對(duì)表達(dá)量，但對(duì)Keap1沒有顯著影響。
　　結(jié)

6、論：
　　缺氧或H2O2可引起L02細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，Hyp可減弱此損傷，對(duì)L02細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù)，其機(jī)制可能是通過促進(jìn)Nrf2向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，與Bach1競爭細(xì)胞保護(hù)蛋白啟動(dòng)子區(qū)域中的抗氧化反應(yīng)元件(ARE)，從而上調(diào)細(xì)胞保護(hù)蛋白的水平來發(fā)揮其細(xì)胞保護(hù)作用。本課題以Hyp為研究對(duì)象，從Nrf2/Keap1-Bach1競爭性調(diào)控細(xì)胞保護(hù)蛋白，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)恢復(fù)的角度探討其作用機(jī)制，為闡明黃酮類藥物藥理機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為充