MicroRNA-148a對胰腺癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機制.pdf

1、目的：
　　探討microRNA-148a（miR-148a）對胰腺癌BxPC-3細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機制。
　　方法：
　　（1）采用實時熒光定量PCR（qPCR）檢測33例胰腺癌組織中miR-148a的表達水平，并以其中位值分為低表達組和高表達組，分析miR-148a表達與臨床病理因素的關系。
　?。?）通過LipofectamineTM2000介導將 miR-148a模擬物（mimic）

2、轉(zhuǎn)染至胰腺癌BxPC-3細胞，將細胞分為3組：Blank組（轉(zhuǎn)染Lipofectamine作為空白對照組），miR-NC組（轉(zhuǎn)染negative mimic作為陰性對照組），miR-148a mimic組（轉(zhuǎn)染miR-148a mimic作為實驗組）。轉(zhuǎn)染24小時后，qPCR檢測miR-148a表達水平，光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變，Western blot檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標記物（E-cadherin、Vimentin和N-cadhe

3、rin）的表達，Transwell檢測細胞的遷移及侵襲能力。
　　（3）熒光素酶報告基因試驗驗證miR-148a可與Wnt10b3′UTR相結合；qPCR法檢測胰腺癌組織中miR-148a與Wnt10b表達水平，并分析其相關性；miR-148a mimic/inhabitor轉(zhuǎn)染胰腺癌BxPC-3細胞，Western blot檢測Wnt10b蛋白以及Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白（β-catenin、Cyclin D1

4、和MMP-9）表達。
　　結果：
　?。?）miR-148a低表達組與高表達組的TNM分期、腫瘤大小差異具有顯著性（P＜0.05）。
　?。?）光學顯微鏡觀察到實驗組細胞形態(tài)學發(fā)生了顯著變化，表現(xiàn)為鋪路石樣上皮細胞顯著增多，而陰性對照組與空白對照組仍以梭形、成纖維細胞形態(tài)的間質(zhì)細胞為主。與兩對照組相比，miR-148a mimic組上皮標記物E-cadherin表達顯著增高（3.17±0.32 vs.1.00±0.00

5、 vs.1.08±0.17，P＜0.05），而間質(zhì)表型標記物Vimentin和N-cadherin表達則明顯下調(diào)（Vimentin：0.45±0.09 vs.1.00±0.00 vs.0.97±0.12；N-cadherin：0.55±0.03 vs.1.00±0.00 vs.0.94±0.06，均P＜0.05）。同時，miR-148a mimic組細胞遷移及侵襲能力顯著下降（遷移實驗：265±53 vs.256±48 vs.83±23

6、；侵襲實驗：108±20 vs.103±13 vs.33±11，均P＜0.001）。
　?。?）雙熒光素酶報告基因試驗證實miR-148a可與Wnt10b3′UTR相結合；上調(diào)胰腺癌 BxPC-3細胞 miR-148a的表達能顯著抑制 Wnt10b的表達（1.00±0.00 vs.1.03±0.08 vs.0.17±0.02，P＜0.05），而下調(diào)miR-148a表達能顯著上調(diào)Wnt10b表達（1.00±0.00 vs.1.12±

7、0.19 vs.2.57±0.31，P＜0.05）。胰腺癌組織中Wnt10b和miR-148a的表達水平呈負相關性（r=-0.2635，P＜0.01）。以上結果表明胰腺癌中 Wnt10b是 miR-148a的直接作用靶基因。上調(diào)胰腺癌BxPC-3細胞miR-148a的表達能顯著下調(diào)Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白（β-catenin、Cyclin D1和MMP-9）的表達（β-catenin：1.00±0.00 vs.1.09

8、±0.11 vs.0.27±0.05；Cyclin D1：1.00±0.00 vs.0.96±0.07 vs.0.19±0.03；MMP-9：1.00±0.00 vs.1.13±0.10 vs.0.26±0.03，均P＜0.05）。
　　結論：
　　miR-148a在胰腺癌組織中的表達與TNM分期和腫瘤大小有關。上調(diào)miR-148a可抑制胰腺癌 BxPC-3細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移，其作用機制與miR-148a靶向抑制Wn