抗輻靈活性成分對微波輻射致PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、背景與目的：
　　微波是頻率為300 MHz～300 GHz的電磁波，廣泛應(yīng)用于通訊、醫(yī)療、軍工等領(lǐng)域和日常生活，同時具有廣泛生物效應(yīng)。人們暴露在微波輻射下的機(jī)會日益增加，微波輻射損傷的主要敏感靶部位有中樞神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、心血管及免疫系統(tǒng)等,其中尤以中樞神經(jīng)系統(tǒng)最為敏感，研究也較多。如何防護(hù)和減小微波輻射對機(jī)體的損傷效應(yīng)成為了當(dāng)前的熱點。其防護(hù)措施目前仍以物理防護(hù)為主，以各種含金屬絲等屏蔽或吸收材料的防護(hù)服應(yīng)用最為廣泛。此外，

2、一些微波輻射防治藥物，國內(nèi)外也都屢有報道，但仍缺乏比較令人信服的實驗數(shù)據(jù)，抗微波輻射藥物的研究也相對滯后。
　　抗輻靈是一種新型抗微波輻射損傷的中藥復(fù)方，按照“君臣佐使”原則由黃芪、赤芍、丹參和紅萍等原料制成。實驗室（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所）前期研究表明，抗輻靈復(fù)方對微波輻射致大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和組織結(jié)構(gòu)的損傷具有保護(hù)改善作用[1]，但具體到哪種活性成分起主要作用及相關(guān)的有效劑量是多少，發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制如何等都待進(jìn)一步

3、的實驗研究證明。因此，本研究以神經(jīng)元樣細(xì)胞為觀察對象并試圖從氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)入手，旨在探討活性成分黃芪總苷、赤芍總苷和丹參酮對PC12細(xì)胞的作用，為闡明抗輻靈保護(hù)微波輻射損傷的機(jī)制、尋找新的抗微波輻射損傷藥物和進(jìn)行下一步的動物實驗奠定基礎(chǔ)。
　　材料與方法：
　　體外傳代培養(yǎng)PC12細(xì)胞，NGF（nuclear factor-E2-related factor2）誘導(dǎo)其分化為類神經(jīng)元，培養(yǎng)5～7 d，將其隨機(jī)分為正常對照組、

4、輻射對照組、黃芪總苷(1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml)組、赤芍總苷(1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml)組、丹參酮(1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml)組。分別給予1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml黃芪總苷、赤芍總苷、丹參酮作用48 h后，經(jīng)30 mW/cm2微波輻射6 min，于輻射后即刻采用倒置相差顯微鏡觀察PC12細(xì)胞形態(tài)變化，四甲基偶氮唑鹽比色（methylthiagolyl tetragolium，

5、MTT）法測定細(xì)胞生存率，活性氧探針（dichlorodihydrofluorescin diacetate，DCFH-DA）法測定細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平，硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）法測定細(xì)胞脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛（malonydialdehyde，MDA）含量。采用軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院的微波輻射源均勻輻射，平均功率密度為30 mW/cm2，輻射時間6

6、min。假輻射組進(jìn)行同等條件偽輻射。
　　結(jié)果：
　　1. PC12細(xì)胞誘導(dǎo)分化成類神經(jīng)元：倒置相差顯微鏡下觀察可見，未分化的PC12細(xì)胞呈圓形，折光性好，加入 NGF將其誘導(dǎo)分化后細(xì)胞兩端逐漸長出細(xì)長突起，可交織成網(wǎng)，分化后5～7d類似成熟類神經(jīng)元。
　　2.輻射前后PC12細(xì)胞形態(tài)：黃芪總苷、赤芍總苷、丹參酮作用后經(jīng)微波輻射各組PC12細(xì)胞形態(tài)未見明顯差異。
　　3. PC12細(xì)胞生存率：輻射后6 h，輻射組

7、PC12細(xì)胞較假輻射組生存率明顯降低(P<0.01)；與輻射組比，3μg/ml黃芪總苷給藥組PC12細(xì)胞生存率明顯提高(P<0.01)。
　　4. ROS和MDA水平：輻射后0 h和48 h，輻射組PC12細(xì)胞ROS、MDA水平明顯升高(P<0.01)，與輻射組比，各藥物預(yù)處理組 PC12細(xì)胞 ROS、MDA水平均顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　抗輻靈活性成分黃芪總苷、赤芍總苷、丹參酮能改善微波輻射對PC1