洛伐他汀對(duì)乳腺癌干細(xì)胞特性的影響.pdf

1、目的:
　　研究洛伐他汀(Lovastatin，LV)對(duì)人三陰性乳腺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞(breast cancer stem-like cells，BCSLCs)的體外生物學(xué)特性以及對(duì)人三陰性乳腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響。
　　方法:
　　1、通過干細(xì)胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法從人三陰性乳腺癌細(xì)胞和非三陰性乳腺癌細(xì)胞富集和擴(kuò)增BCSLCs。用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)其表面干細(xì)胞標(biāo)志物CD44/CD24的表達(dá)。通過裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)證

2、實(shí)乳腺癌干細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力。
　　2、用不同濃度LV在常氧或缺氧條件下對(duì)乳腺癌親本細(xì)胞或干細(xì)胞樣細(xì)胞進(jìn)行處理，用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖活性，用劃痕法測(cè)定細(xì)胞體外遷移能力，用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡。
　　3、用不同濃度LV對(duì)人三陰性乳腺癌細(xì)MDA-MB-231進(jìn)行處理，用蛋白質(zhì)免疫印跡法分析乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD44、EMT相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子β-catenin和上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)水平。
　　4、小鼠皮下注

3、射MDA-MB-231細(xì)胞1周后，給予不同濃度的LV(2mg/kg或10 mg/kg)或生理鹽水，每周給藥2次持續(xù)給藥3周。每周測(cè)量瘤體體積;處死動(dòng)物時(shí)取乳腺腫瘤組織測(cè)量瘤體重量;腫瘤組織經(jīng)常規(guī)石蠟包埋，進(jìn)行組織病理學(xué)和免疫組化分析。
　　結(jié)果:
　　1、經(jīng)超低粘附懸浮培養(yǎng)法從三陰性及非三陰性乳腺癌細(xì)胞富集和擴(kuò)增BCSLCs。用流式分析儀對(duì)MDA-MB-231來源的BCSLCs表面標(biāo)志進(jìn)行鑒定獲得CD44+/CD24low的

4、細(xì)胞純度約80％;在裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中，與MDA-MB-231親本細(xì)胞相比，MDA-MB-231干細(xì)胞樣細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤能力更強(qiáng)。表明我們分離富集的BCSLCs具有乳腺癌干細(xì)胞特征。
　　2、與來源于非三陰性乳腺癌的親本細(xì)胞和干細(xì)胞樣細(xì)胞相比，LV能夠優(yōu)先抑制三陰性乳腺癌來源的親本細(xì)胞和干細(xì)胞樣細(xì)胞的增殖和遷移并優(yōu)先促進(jìn)其凋亡。另外，與親本細(xì)胞相比，LV能夠優(yōu)先抑制乳腺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞的增殖。
　　3、LV能夠抑制三陰性乳腺癌細(xì)

5、胞中與干細(xì)胞特征相關(guān)蛋白的水平，表明LV能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的干性特征。
　　4、在裸鼠皮下移植瘤模型中，LV能夠抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231移植瘤的瘤體重量和體積。瘤體組織標(biāo)本免疫組化分析顯示與對(duì)照組相比，LV處理組CD44、CD138蛋白水平顯著降低，表明LV在體內(nèi)能夠抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231移植瘤的成瘤能力和干性特征。
　　結(jié)論:
　　1.通過懸浮培養(yǎng)法富集和擴(kuò)增的BCSLCs具有乳腺癌