芹菜素對人膀胱癌和前列腺癌的作用及其機制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 芹菜素對膀胱癌T24細胞的抑制作用及其機制的研究
　　背景：
　　在我國，膀胱癌是泌尿系腫瘤發(fā)病率最高的惡性腫瘤。近年來，膀胱癌的發(fā)病率還在呈現一種上升的趨勢。膀胱癌的主要治療手段是手術和化療等。芹菜素是一種天然的黃酮類化合物，廣泛存在于我們日常能接觸到的水果和蔬菜中。芹菜素被證明在多種腫瘤中具有抑癌作用，但其對膀胱癌的作用尚未得到驗證。
　　目的：
　　本研究

2、通過體外實驗探索芹菜素對膀胱癌T24細胞系的影響和相應的作用機制，并通過體內的裸鼠成瘤實驗進一步驗證細胞實驗的結果。
　　方法：
　　芹菜素以不同濃度（10-80μM）和不同時間(24-72h)作用于T24細胞，采用MTT法檢測T24細胞在增殖和活性方面的改變，采用流式細胞術檢測細胞在周期和凋亡方面的改變，采用Transwell實驗檢測細胞在運動能力方面的改變，采用Western Blot實驗檢測相應蛋白的改變。采用BSP克

3、隆測序法檢測PTEN的甲基化水平。構建裸鼠成瘤模型檢測芹菜素在體內實驗中對腫瘤的影響。
　　結果：
　　1.芹菜素以一種時間-劑量依賴的方式抑制膀胱癌T24細胞的增殖，表現為隨著濃度的升高、作用時間的延長，對細胞的抑制作用越強。
　　2.芹菜素作用濃度為10和20μM時，T24細胞的增殖未被明顯抑制，當濃度增加到40和80μM時，增殖被明顯抑制。作用時間為24h，48h和72h的IC50濃度分別為82.5，52.9和4

4、3.8μM。
　　3.芹菜素以10和20μM的濃度作用于T24細胞24小時后，經Transwell實驗檢測，細胞的遷移和侵襲能力都明顯減弱。
　　4.芹菜素以20，40和80μM的濃度作用于T24細胞24小時后，經流式細胞儀（PI和annexinⅤ雙染法）檢測，細胞出現了明顯的凋亡，以晚期凋亡的增加為主，并隨著濃度的提高，凋亡比例相應提高。
　　5.芹菜素以20，40，80，120和160μM的濃度作用于T24細胞24

5、小時后，經流式細胞術檢測，細胞出現了顯著的G2/M期阻滯，并隨著濃度的升高，G2/M期阻滯愈加明顯。
　　6.芹菜素以20，40和80μM的濃度作用于T24細胞24小時后，隨著濃度增加，細胞pro caspase-3的表達逐漸下降，active caspase-3的表達逐漸上升，PARP裂解片段的表達逐漸上升，細胞中p-Akt、PDK和PI3K的表達逐漸下降，同時細胞內促凋亡蛋白Bax、Bad的表達逐漸升高，抗凋亡蛋白Bcl-xl

6、、Bcl-2的表達逐漸下降，而Akt的表達沒有明顯變化。
　　7.芹菜素與PI3K抑制劑LY294002同時作用后，與芹菜素單獨作用相比，芹菜素導致的p-Akt的下降，PARP裂解片段的增加，active caspase-3的上調都不同程度得到了削弱。
　　8.芹菜素以20，40和80μM的濃度作用于T24細胞后，PTEN蛋白的表達逐漸上升，并且在T24，UM-UC-3和5637細胞中，芹菜素都下調了PTEN的甲基化水平。<

7、br>　　9.在裸鼠膀胱癌成瘤實驗中，隨著局部注射芹菜素濃度的增加，裸鼠背部形成的腫瘤體積逐漸縮小。
　　結論：
　　芹菜素以濃度-時間依賴的方式抑制T24細胞的增殖能力，并誘導其凋亡和G2/M期周期阻滯，抑制T24細胞的遷移侵襲能力。芹菜素抑制T24細胞PI3K/PDK/Akt通路的激活，調節(jié)Bcl-2蛋白家族進而誘導凋亡。
　　第二部分 芹菜素增強順鉑對膀胱癌T24細胞的抑制作用及機制的研究
　　背景：

8、>　　聯合化療（MVAC方案或GC方案等）是治療轉移性膀胱癌的一線方案，鉑是最有效的膀胱癌全身化療藥物，然而以順鉑為基礎的一線化療方案增加的中位生存時間僅為7-9個月。對順鉑產生藥物抵抗是膀胱癌化療的一個重大障礙，核苷酸切除修復(NER)是順鉑耐藥重要機制之一，而ERCC-1是NER途徑的重要因素。
　　目的：
　　本研究通過體外實驗研究芹菜素與順鉑聯合使用對膀胱癌T24細胞的作用及其機制。
　　方法：
　　順鉑

9、以不同濃度(5-30μM)作用于T24細胞24小時，采用MTT法檢測細胞增殖和活性的改變。選取順鉑和芹菜素單獨或共同作用于T24細胞，采用MTT法和克隆形成實驗檢測細胞增殖和活性的改變，采用Trasnwell實驗檢測細胞侵襲能力的改變，采用RT-PCR實驗檢測ERCC-1 mRNA的表達，采用Western Blot實驗檢測相應蛋白的改變。
　　結果：
　　1.順鉑以濃度依賴的方式抑制膀胱癌T24細胞的增殖，濃度越高，抑制作

10、用越明顯。順鉑作用于T24細胞24小時的IC50約為14.8μM。
　　2.順鉑（15μM）和芹菜素（4μM）單獨或共同作用于T24細胞24小時，MTT實驗表明芹菜素增強了順鉑對T24細胞增殖的抑制作用，克隆形成實驗表明芹菜素增強了順鉑對T24細胞克隆形成能力的抑制作用。
　　3.順鉑(10μM)和芹菜素（20μM）單獨或共同作用于T24細胞24小時，Transwell實驗表明芹菜素增強了順鉑對T24細胞侵襲能力的抑制作用。

11、
　　4.順鉑（15μM）和芹菜素（40μM）單獨或共同作用于T24細胞24小時，RT-PCR實驗表明順鉑上調了T24細胞ERRC-1 mRNA和蛋白的表達，而芹菜素明顯抑制了順鉑對ERRC-1 mRNA和蛋白的上調作用。
　　結論：
　　順鉑以濃度依賴的方式抑制膀胱癌T24細胞的增殖能力。芹菜素能明顯增強順鉑對T24細胞的抑制作用，并且芹菜素能明顯下調順鉑導致的T24細胞中ERCC-1的上調效果。
　　第三部分

12、 芹菜素對前列腺癌DU145細胞運動能力的影響及其機制的研究
　　背景：
　　在歐美國家，前列腺癌是男性中發(fā)病率最高的惡性腫瘤，并且是導致死亡的腫瘤的第二位。在我國，前列腺癌的發(fā)病率也在逐年上升。相比歐美國家，亞洲男性較低的前列腺癌發(fā)病率與飲食因素有一定的聯系。有研究表明芹菜素對前列腺癌有一定的抑制作用，但能否抑制前列腺癌的轉移尚未可知。
　　目的：
　　本研究通過體外實驗驗證芹菜素對前列腺癌DU145細胞運動能

13、力的影響及其機制。
　　方法：
　　芹菜素以不同濃度(10-80μM)和不同時間(24-48h)作用于DU145細胞，采用MTT法檢測細胞增殖和活性的改變，采用流式細胞儀檢測細胞周期的改變，采用劃痕實驗和Transwell實驗檢測細胞運動能力的改變，采用RT-PCR檢測MMPsmRNA的改變，采用Western Blot實驗檢測相應蛋白的改變。
　　結果：
　　1.芹菜素以一種時間-劑量依賴的方式抑制前列腺癌DU

14、145細胞的增殖，表現為濃度越高、作用時間越長，對細胞的抑制作用越強。
　　2.芹菜素的作用濃度為40和80μM時，對DU145細胞的IC50值在24和48小時分別為80.8和49.3μM。
　　3.芹菜素以10和20μM的濃度作用于DU145細胞24小時后，劃痕試驗表明細胞的遷移能力得到了抑制，Transwell實驗表明細胞的運動能力得到了抑制。
　　4.芹菜素以20，40和80μM的濃度作用于DU145細胞24小時

15、后，經流式細胞儀檢測，細胞出現了G2/M期阻滯。隨著濃度的增加，G2/M期的比例逐漸升高。
　　5.芹菜素5，10和20μM的濃度作用于DU145細胞24小時后，隨著濃度的增加，細胞中E-cadherin蛋白的表達逐漸升高，Snail和Vimentin蛋白的表達逐漸下降，MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表達都逐漸下降。
　　結論：
　　芹菜素以濃度-時間依賴的方式抑制DU145細胞的增殖能力，并誘導G2/M期周