水通道蛋白-3在食管鱗癌區(qū)域癌化中的表達及臨床相關研究.pdf

1、食管癌（Esophageal carcinoma，EC）是一種最常見的消化道惡性腫瘤，位居全世界癌癥發(fā)病率第四位。在中國食管癌已經成為主要的消化道腫瘤死因之一?，F階段尚不清楚食管癌的確切病因，臨床上大多數食管癌患者就診時已處于中晚期，近年來隨著外科診療水平的提高其術后5年生存率僅僅為25％左右。然而，早期食管癌術后5年生存率可達90%以上。為此探討針對食管癌的早期致病機制，已經成為臨床食管癌主要的研究方向之一。目前為止，食管癌致病機制的

2、臨床和基礎研究仍無突破。隨著分子生物學技術研究的提高，已經證實在頭頸部鱗癌、肺癌、口腔癌、結腸癌中包括食管鱗癌在內的多種上皮來源性的腫瘤中都有可能存在“區(qū)域癌化”等早期癌變現象。水通道蛋白-3(AQP-3，aquaporin-3)作為水通道蛋白家族中一重要亞型，具有該蛋白家族基因的共同特性，研究發(fā)現AQP3曾作為致癌基因在食管癌的分化增殖和侵襲轉移中起著重要的作用。目前對于食管鱗癌的研究國內很少見從“區(qū)域癌化”理論角度來探討食管癌早期發(fā)

3、病機制，尤其缺乏對食管鱗癌區(qū)域癌化內水通道蛋白-3(AQP3)表達異常的系統性認識及相關臨床研究。近年研究結果顯示，AQP3在多種不同惡性腫瘤內表達水平與腫瘤的增殖分化、遠處侵襲轉移及生存預后存在相關性。依據現有文獻報道，在食管鱗癌不同組織區(qū)域中存在AQP3表達差異，其中AQP3表達含量與食管鱗癌的臨床預后具有相關性。本研究采用Lugol's染色及HE化學染色法初步篩選出食管鱗癌中具有“區(qū)域癌化組織”的標本，通過Real-Time PC

4、R實時熒光定量和Western-blot蛋白質免疫印跡技術從基因和蛋白質水平驗證AQP3基因在食管正常組織、區(qū)域癌化及配對鱗癌組織中的表達差異，并分析其與相關影響因素之間的關系；結合術后隨訪系統評估食管鱗癌患者AQP3表達水平及相關臨床預后因素對生存時間的影響；最后從基因、蛋白質組學方面為食管鱗癌的早期發(fā)病機制提供新的思路。
　　目的：依據食管鱗癌“區(qū)域癌化”理論基礎，用Lugol's染色及HE化學染色法初步篩選出食管鱗癌中“區(qū)域

5、癌化組織”即Lugol's液染色陽性病理表型正常的食管粘膜組織。利用Real-TimePCR實時熒光定量和Western-blot蛋白質免疫印跡技術驗證水通道蛋白-3（AQP3）在食管正常上皮、區(qū)域癌化及食管鱗癌三種不同組織中的表達，并結合臨床相關預后因素探討AQP3表達與食管鱗癌生存時間的關系，初步了解AQP3基因在食管鱗癌癌變過程中的作用。
　　方法：（1）回顧性分析2005年1月至2015年12月間甘肅省人民醫(yī)院及甘肅省腫瘤

6、醫(yī)院胸外科食管鱗癌手術標本共102例。所有收集的標本均行食管粘膜Lugos’s液染色，初步篩選出65例患者存在“區(qū)域癌化”組織；（2）將65例符合納入標準的標本分別采用Real-Time PCR和Western-blot從基因及蛋白層面檢測水通道蛋白-3（AQP3）在65例食管鱗癌區(qū)域癌化組織中的表達情況。（3）依據病歷查詢系統及生存期回訪系統回顧性收集65例患者臨床相關信息。采用 Kaplan-Meier生存曲線分析比較各相關獨立因素

7、生存期；采用Log-Rank檢驗比較各組間生存時間差異；Cox回歸模型分析判斷影響食管鱗癌預后的獨立因素，以α=0.05為差異有顯著統計學意義。
　　結果：
　　1.Lugol's染色及HE化學染色法初步篩選出食管鱗癌田野癌化區(qū)域。
　　證實了碘染色異常但病理表型正常的食管上皮符合區(qū)域癌化的條件，是食管鱗癌的早期病變。
　　2.AQP3mRNA、蛋白表達水平與食管鱗癌的關系。
　　AQP3mRNA、蛋白表達

8、在三種不同食管組織中存在顯著的統計學差異，其表達含量依次升高（P<0.05）。男性、家族史、淋巴結轉移、高中分化、浸潤深度、腫瘤大小，與AQP3mRNA陽高性表達率相關，且AQP3表達蛋白的變化趨勢與AQP3基因表達具有一致性。
　　3.生存分析
　　Kaplan-Meier生存分析顯示：食管鱗癌生存期與性別、家族史、淋巴結轉移、浸潤深度、分化程度、腫瘤病理形態(tài)、AQP3mRNA及蛋白表達等單因素相關。Cox風險回歸模型顯示