食管鱗癌差異表達(dá)蛋白的研究.pdf

1、目的：
　　食管癌（EC）是最常見的高發(fā)的惡性腫瘤之一，在所有的惡性腫瘤中排在第六位。與西方國家腺癌類型為主的情況不同，食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）是我國最常見的組織類型。近年來食管癌在基礎(chǔ)與臨床方面都進(jìn)行了大量的研究，但預(yù)后仍沒有得到很大的改善，術(shù)后五年生存率仍只有25％左右,主要原因是缺乏有效的早期診斷的生物分子標(biāo)志物和生物靶向治療。
　　食管癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多基因參與、多因素作用、多階段經(jīng)歷才最終形成的極其復(fù)雜的生物

2、學(xué)行為。先前的研究多集中在基因水平，但在DNA和RNA水平的改變并不總引起相似的蛋白的變化，也不能真實客觀的反映疾病的實際階段和演變過程。以雙向電泳及質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的蛋白組學(xué)，為篩選腫瘤特異性蛋白標(biāo)志物提供了一個全新的辦法。
　　本研究采用差異蛋白組學(xué)技術(shù)，通過對比研究食管鱗癌組織及配對的癌旁正常組織總蛋白表達(dá)情況，建立高分辯率及重復(fù)性好的雙向凝膠電泳圖譜，以期篩選和鑒定出與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白，用于食管鱗癌的早期診斷、預(yù)后

3、評判等相關(guān)的分子標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌生物靶向治療的新靶點。
　　方法：
　　選擇臨床診斷明確的10對食管鱗癌組織和正常食管組織進(jìn)行比較研究。提取總蛋白，并進(jìn)行蛋白的定量。中等精細(xì)的非線性PH3-5.6的長24cm的固定pH梯度的IPG膠條進(jìn)行第一向的等電聚焦（IEF），1.25%的SDS-PAGE行第二向分離總蛋白。差異蛋白質(zhì)點經(jīng)Image Master2D Platinum V ersion7.0軟件分析得出后，切割、消化

4、，MALDI-ToF質(zhì)譜分析得到特異的肽質(zhì)指紋圖譜(peptide mass fingerprint，PMF)，利用PMF和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索進(jìn)行蛋白鑒定。
　　結(jié)果：
　　1.食管鱗癌及癌旁正常組織的電泳圖平均蛋白質(zhì)點為834±32和802±29，平均匹配的點數(shù)為729±34和715±24。
　　2.食管鱗癌和癌旁正常組織圖譜分析后共有38個差異蛋白點，食管鱗癌組織中表達(dá)量上調(diào)的點有16個，在癌旁正常組織中表達(dá)量上調(diào)的