高鈣離子誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)MCP-1和HMGB1的體外研究.pdf

1、目的：觀察體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞在高鈣離子環(huán)境下細(xì)胞損傷及炎性因子MCP-1和HMGB1的表達(dá)。
　　方法：體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2細(xì)胞），使用CaCl2配制成不同鈣離子濃度的溶液作為刺激劑，實(shí)驗(yàn)分為正常對照組（+正常培養(yǎng)液）、CaI組（5mmol/L Ca2+液）、CaII組（10 mmol/L Ca2+液）、CaIII組（15 mmol/L Ca2+液）。各組細(xì)胞分別培養(yǎng)至3h、6h、9h時，采用MTT法檢測細(xì)胞

2、活力。培養(yǎng)6h時，采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）進(jìn)行細(xì)胞凋亡染色，觀察各組細(xì)胞凋亡情況；同時收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，采用ELISA法分別檢測各組細(xì)胞上清液過氧化氫（H2O2）和8-IP濃度，微量酶標(biāo)儀法檢測各組細(xì)胞上清液乳酸脫氫酶（LDH）活性。此外，培養(yǎng)6h時收集各組細(xì)胞，采用RT-qPCR法檢測細(xì)胞MCP-1和HMGB1的mRNA表達(dá)情況；并收集各組細(xì)胞上清液，采用ELISA法檢測其MCP-1、HMGB1的含量。

3、　　結(jié)果：隨著細(xì)胞培養(yǎng)液中鈣離子濃度的增加，細(xì)胞活力抑制率和細(xì)胞凋亡明顯增加。LDH活性在正常對照組、Ca I組、Ca II組、Ca III組分別為16.67±4.43U/L、51.42±7.70 U/L、69.15±8.54 U/L、85.46±8.60 U/L，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05）。細(xì)胞上清液H2O2的濃度在正常對照組、Ca I組、Ca II組、Ca III組分別為17.30±0.28 mmol/L、19.10±

4、0.33mmol/L、21.56±0.28mmol/L、24.30±0.16 mmol/L，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05）。細(xì)胞上清液8-IP的含量在正常對照組、CaI組、CaII組、CaIII組分別為21.55±4.31 ng/ml,61.12±4.55ng/ml,78.48±2.57 ng/ml,94.74±3.34 ng/ml，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05）。RT-qPCR的結(jié)果顯示，與對照組比較，3個鈣離子誘

5、導(dǎo)組細(xì)胞MCP-1和HMGB1的mRNA表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05）。此外，各組細(xì)胞上清液MCP-1含量測定值分別為13.48±1.60pg/mL、22.93±2.86 pg/mL、40.57±1.63 pg/mL、30.39±1.61pg/mL，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05）；細(xì)胞上清液HMGB1含量分別為138.17±5.99 pg/mL、181.82±4.54pg/mL、346.81±20.26pg/