MDR-ABaβ-內(nèi)酰胺酶基因和整合子的研究及親緣性分析.pdf

1、目的:了解天津地區(qū)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株的耐藥性及耐藥模式;分析多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生及耐藥基因和整合子分布情況;檢測與插入序列ISAba1有關(guān)的OXA-23 mRNA在8株亞胺培南耐藥株中的表達(dá)情況;掌握多重耐藥臨床分離株分子流行病學(xué)情況。
　　方法:收集2007年2月至2008年2月天津市六所三級(jí)甲等醫(yī)院臨床分離的78株鮑曼不動(dòng)桿菌，用K-B法和微量肉湯稀釋法對(duì)所有菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，篩選出多重耐藥株。應(yīng)

2、用三維試驗(yàn)法對(duì)多重耐藥株進(jìn)行ESBLs，AmpC酶表型的篩選，應(yīng)用雙紙片增效法對(duì)亞胺培南耐藥株進(jìn)行金屬酶表型篩選，并以PCR方法的對(duì)相關(guān)耐藥基因進(jìn)行擴(kuò)增。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR的方法對(duì)8株亞胺培南耐藥株OXA-23 mRNA的表達(dá)進(jìn)行檢測，同時(shí)對(duì)8株菌進(jìn)行插入序列ISAba1的擴(kuò)增。以PCR的方法檢測多重耐藥株的三類整合酶基因，并用RFLP(restrictionfragment length polymorphism)-PCR的方法分析整

3、合子可變區(qū)基因盒結(jié)構(gòu)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，抽取陽性PCR產(chǎn)物若干個(gè)進(jìn)行測序，測序結(jié)果在genbank上進(jìn)行同源性分析。以多基因聚類分析的方法對(duì)多重耐藥株進(jìn)行菌株親緣性分析。
　　結(jié)果:從78株臨床分離菌中共篩選出55株多重耐藥株，共形成22種耐藥模式，其中9種較為常見。三維試驗(yàn)結(jié)果表明有7株產(chǎn)ESBLs，39株產(chǎn)AmpC酶，其中有4株同時(shí)表現(xiàn)為ESBLs陽性，8株亞胺培南耐藥株中有4株金屬酶表型陽性。PCR結(jié)果顯示55株多重耐藥鮑曼不動(dòng)

4、桿菌中有12株產(chǎn)TEM型β-內(nèi)酰胺酶，5株產(chǎn)PER型β-內(nèi)酰胺酶，1株產(chǎn)VEB-1型β-內(nèi)酰胺酶，2株產(chǎn)IMP-1型金屬酶，3株產(chǎn)IMP-2型金屬酶，10株產(chǎn)OXA-23型碳青霉烯酶，未檢測到SHV、CTX-M-1組、VIM-2、OXA-24群β-內(nèi)酰胺酶。實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果顯示，8株亞胺培南耐藥株中3株菌OXA-23 mRNA表達(dá)升高，另5株菌OXA-23 mRNA表達(dá)減低，所有菌株以PCR的方法均檢測出插入序列ISAba1。PCR結(jié)

5、果顯示，55株多重耐藥株中有47株菌含有Ⅰ類整合酶基因，其中有23株檢出含有可變區(qū)結(jié)構(gòu)，可變區(qū)PCR產(chǎn)物有2個(gè)片段長度:1500bp（4株）和2000bp（19株），RFLP結(jié)果顯示1500bp可變區(qū)具有相同的DNA序列，2000bp可變區(qū)也具有相同的DNA序列，未檢出Ⅱ、Ⅲ類整合酶基因。多基因聚類分析結(jié)果表明55株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌共含有3個(gè)克隆株。
　　結(jié)論:55株多重耐藥鮑曼不動(dòng)感菌對(duì)亞胺培南敏感性最高，敏感率為85.5％