兒童持續(xù)性及慢性免疫性血小板減少癥DNA甲基轉(zhuǎn)移酶mRNA表達(dá).pdf

1、背景：
　　免疫性血小板減少癥(Immune thrombocytopenia, ITP)是兒童最常見(jiàn)的出血性疾病。按照病程分為新診斷ITP、持續(xù)性ITP、慢性ITP，新診斷ITP治療效果好，但持續(xù)性及慢性ITP治療效果差。ITP的具體發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明。
　　研究證實(shí)DNA甲基化異常參與了多種自身免疫性病、腫瘤等疾病的發(fā)生、發(fā)展。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)成人ITP患者存在DNA低甲基化，且這種DNA低甲基化參與了ITP的發(fā)病。

2、但鮮有關(guān)于DNA甲基化與兒童持續(xù)性及慢性ITP發(fā)病機(jī)制的關(guān)系的研究。
　　目的：
　　本研究通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR)方法研究?jī)和掷m(xù)性及慢性ITP DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltransferase，DNMTs)mRNA表達(dá)，探討DNA甲基化與兒童持續(xù)性及慢性ITP發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。
　　方法：

3、　　1、研究對(duì)象根據(jù)2013年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)血液學(xué)組制定的ITP診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)，選取2014年1月-2015年1月期間于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒內(nèi)一科住院和門診治療或隨訪的持續(xù)性及慢性ITP患兒25例作為實(shí)驗(yàn)組，同期選擇門診健康體檢兒童20例作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組4周內(nèi)均未應(yīng)用葉酸、維生素B6、維生素B12。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組年齡、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。標(biāo)本采集:無(wú)菌采集實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組空腹外周血2ml，EDTA抗凝。
　　2、測(cè)

4、定DNMTs mRNA表達(dá)分離外周血淋巴細(xì)胞，Trizol法提取RNA，RT-PCR法測(cè)定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表達(dá)。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，計(jì)數(shù)資料用百分比(％)表示;兩樣本均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn);DNMTs mRNA表達(dá)與臨床資料之間的相關(guān)性分析采用Bivariate相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有顯著

5、性。
　　結(jié)果：
　　1、實(shí)驗(yàn)組PLT(36.2±19.6)×109/L，正常對(duì)照組PLT(168.8±46.8)×109/L，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-11.85，P=0.000)。
　　2、實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組DNMT1 mRNA表達(dá)分別為（0.17±0.05），(0.27±0.10)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.912，P=0.001);實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組DNMT3AmRNA表達(dá)分別為(0.2

6、0±0.10)，（0.32±0.11），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.779，P=0.000);實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組DNMT3B mRNA表達(dá)分別為(0.16±0.11)，(0.31±0.11)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-4.641，P=0.000)。
　　3、DNMT1與DNMT3B mRNA表達(dá)存在正相關(guān)性(r=0.433，P=0.031); DNMT3A與DNMT3B mRNA表達(dá)存在正

7、相關(guān)性(r=0.721，P=0.000)。DNMT1與DNMT3AmRNA表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.277，P=0.180)。
　　4、DNMTs mRNA表達(dá)與年齡呈顯著的負(fù)相關(guān)性(DNMT1:r=-0.565，P=0.003;DNMT3A: r=-0.563,P=0.003; DNMT3B: r=-0.506, P=0.01)。
　　5、DNMT1 mRNA表達(dá)在男性、女性組分別為(0.184±0.059)、(0.164±0

8、.050)，不同性別表達(dá)水平無(wú)明顯差異(t=0.948，P=0.353); DNMT3A mRNA表達(dá)在男性、女性組分別為(0.187±0.082)、(0.219±0.115)，不同性別表達(dá)水平無(wú)明顯差異(t=-0.78，P=0.443); DNMT3B mRNA表達(dá)在男性、女性組分別為(0.123±0.106)、(0.182±0.116)，不同性別表達(dá)水平無(wú)明顯差異(t=-1.29，P=0.210)。
　　結(jié)論：
　　1、