大腸桿菌DnaA蛋白對uvrB和gyrA基因的表達調(diào)控.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli)是生物化學與分子生物學和遺傳學研究的重要單細胞模式生物。對大腸桿菌DNA復制、細胞周期以及其基因調(diào)控的深入研究對真核細胞乃至癌細胞的研究具借鑒作用。復制起始蛋白DnaA也是轉(zhuǎn)錄因子，通過結(jié)合在啟動子區(qū)域的DnaA-box來調(diào)控dnaA、mioC和nrdAB等基因和操縱子的表達。
　　 本文以探討DnaA蛋白對細胞周期的調(diào)控作用為長遠目標，研究了DnaA對uvrB、gyrA和seqA基因

2、表達的調(diào)控作用。用染色體基因一步失活法，把報告基因lacZ插入在染色體上靶基因seqA、gyrA和uvrB的下游，構(gòu)建了啟動子活性分析細胞WRH10、WRH28和WRH37。同時，把seqAp、gyrAp、uvrBp3、uvrBp1-2啟動子分別插入在pTAC3953質(zhì)粒lacZ基因起始密碼子前，得到了啟動子活性分析質(zhì)粒。在不同DnaA條件下，通過Miller法測定β半乳糖苷酶活性來研究DnaA對這些基因的表達調(diào)控。結(jié)果發(fā)現(xiàn)降低DnaA

3、蛋白對DnaA-box的結(jié)合能力或可用量都提高了uvrB基因的表達，而額外DnaA卻降低了其表達，表明DnaA直接調(diào)控uvrB基因表達。在dnaA345突變體中，包含LexA結(jié)合位點的uvrBp1-2啟動子活性明顯比uvrBp3高，這可能是因為LexA和DnaA協(xié)同調(diào)控uvrB基因的表達。另外，DnaA345突變蛋白引起染色體gyrA基因表達的提高，而且gyrA啟動子在質(zhì)粒上的活性也受DnaA影響，表明DnaA可能參與調(diào)節(jié)該基因的表達。