大腸桿菌DnaA蛋白對(duì)uvrB和gyrA基因的表達(dá)調(diào)控.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli)是生物化學(xué)與分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究的重要單細(xì)胞模式生物。對(duì)大腸桿菌DNA復(fù)制、細(xì)胞周期以及其基因調(diào)控的深入研究對(duì)真核細(xì)胞乃至癌細(xì)胞的研究具借鑒作用。復(fù)制起始蛋白DnaA也是轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)結(jié)合在啟動(dòng)子區(qū)域的DnaA-box來(lái)調(diào)控dnaA、mioC和nrdAB等基因和操縱子的表達(dá)。
　　 本文以探討DnaA蛋白對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控作用為長(zhǎng)遠(yuǎn)目標(biāo)，研究了DnaA對(duì)uvrB、gyrA和seqA基因

2、表達(dá)的調(diào)控作用。用染色體基因一步失活法，把報(bào)告基因lacZ插入在染色體上靶基因seqA、gyrA和uvrB的下游，構(gòu)建了啟動(dòng)子活性分析細(xì)胞WRH10、WRH28和WRH37。同時(shí)，把seqAp、gyrAp、uvrBp3、uvrBp1-2啟動(dòng)子分別插入在pTAC3953質(zhì)粒lacZ基因起始密碼子前，得到了啟動(dòng)子活性分析質(zhì)粒。在不同DnaA條件下，通過(guò)Miller法測(cè)定β半乳糖苷酶活性來(lái)研究DnaA對(duì)這些基因的表達(dá)調(diào)控。結(jié)果發(fā)現(xiàn)降低DnaA

3、蛋白對(duì)DnaA-box的結(jié)合能力或可用量都提高了uvrB基因的表達(dá)，而額外DnaA卻降低了其表達(dá)，表明DnaA直接調(diào)控uvrB基因表達(dá)。在dnaA345突變體中，包含LexA結(jié)合位點(diǎn)的uvrBp1-2啟動(dòng)子活性明顯比uvrBp3高，這可能是因?yàn)長(zhǎng)exA和DnaA協(xié)同調(diào)控uvrB基因的表達(dá)。另外，DnaA345突變蛋白引起染色體gyrA基因表達(dá)的提高，而且gyrA啟動(dòng)子在質(zhì)粒上的活性也受DnaA影響，表明DnaA可能參與調(diào)節(jié)該基因的表達(dá)。