幽門螺桿菌外膜蛋白的基因克隆和特性鑒定及其外膜蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:為探索研制H.pylori疫苗的新途徑,我們對(duì)幽門螺桿菌27kDa外膜蛋白(OMP27)進(jìn)行基因克隆及表達(dá).方法:H.pylori菌株NCTC11637經(jīng)培養(yǎng)和收集后,采用酚:氯仿抽提和純化基因組DNA.分別設(shè)計(jì)引物P1和P2,并以該基因組DNA作模板,以PCR方法擴(kuò)增27kDa外膜蛋白基因片段.構(gòu)建pQE30-OMP27重組表達(dá)載體時(shí),pQE30質(zhì)粒載體和純化的PCR產(chǎn)物均用限制性內(nèi)切酶KpnⅠ和HindⅢ雙酶切后,用T4 DN

2、A連接酶將雙酶切的目的基因片段OMP27重組于pQE30的相應(yīng)酶切位點(diǎn)之間,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-Blue.挑選轉(zhuǎn)化克隆、提取質(zhì)粒,并進(jìn)行KpnⅠ和HindⅢ雙酶切和PCR方法鑒定,1﹪瓊脂糖電泳觀察酶切和PCR擴(kuò)增結(jié)果,且經(jīng)測(cè)序分析確認(rèn),篩選出插入目的基因的陽(yáng)性克隆,命名為pQE30-OMP27.挑取單個(gè)含重組質(zhì)粒pQE30-OMP27的工程菌(XL1-Blue)陽(yáng)性克隆,進(jìn)行培養(yǎng)和IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,經(jīng)SDS-PAGE進(jìn)行蛋白

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