2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景和目的:乙型肝炎病毒(HBV)的感染目前是全球性的健康問題,據(jù)報道,約有20億人口曾經(jīng)感染過HBV,其中慢性乙型肝炎感染人數(shù)約為3.5億,每年都有近百萬人死于HBV感染所導致的肝硬化、肝癌等疾病。因此,研究HBV的感染、轉(zhuǎn)錄、復制機制以及研發(fā)有效的乙型肝炎治療藥物及方法刻不容緩。然而現(xiàn)階段缺乏能夠研究HBV-宿主之間相互作用的細胞模型。有研究發(fā)現(xiàn),鈉離子/?;悄懰峁厕D(zhuǎn)運蛋白(Na+/taurocholate Cotransporti

2、ng Polypeptide NTCP)是HBV和HDV功能性受體。NTCP能夠與HBV-PreS1特異性結(jié)合,從而介導HBV侵入和感染宿主細胞。敲除NTCP能夠抑制HBV和HDV的感染,而外源性NTCP的表達,使不易感染的肝癌細胞對HBV、HDV敏感。核激素受體肝細胞核因子4(HNF4)和類視黃醇X受體(Retinoid X Receptors,RXRs)和過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-a

3、ctivated receptor,PPAR)能夠支持HBV前基因組RNA(pgRNA)在非肝源細胞中的合成,這些核激素受體(NRs)能夠調(diào)控病毒基因的轉(zhuǎn)錄和復制。綜合這些研究結(jié)果,我們提出研究假設,HBV功能性受體和核激素受體能支持HBV感染非肝源細以及HBV在非肝源細胞中的轉(zhuǎn)錄復制。
  方法:將表達HBV質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HepG2細胞中,培養(yǎng)120h,取細胞上清液,并提取上清液中病毒顆粒中的DNA檢測拷貝數(shù),作為本實驗所細胞感染所

4、需用的病毒液。將表達NTCP和NRs的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至293T細胞中,用病毒液感染此細胞。數(shù)日后使用時間分辨熒光檢測細胞上清液中HBsAg濃度,提取細胞DNA、RNA,PCR-Southern blot檢測HBV cccDNA、qPCR檢測HBV pgRNA來判斷細胞是否被感染及HBV在胞內(nèi)是否進行轉(zhuǎn)錄和復制。
  結(jié)果:轉(zhuǎn)染NTCP和NRs的293T細胞經(jīng)過HBV感染72h后,用時間分辨熒光檢測細胞上清液中HBsAg濃度達到陽性指標。

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