七鰓鰻PHB2增強(qiáng)細(xì)胞氧化應(yīng)激耐受的作用及機(jī)制初探.pdf

1、七鰓鰻是我國東北部特有的魚形動(dòng)物，是連接無脊椎與脊椎動(dòng)物的橋梁。
　　PHB蛋白廣泛分布于多種生物細(xì)胞中，主要以異源二聚體的形式錨定在線粒體內(nèi)膜，動(dòng)態(tài)維持線粒體結(jié)構(gòu)及功能的穩(wěn)定。當(dāng)線粒體氧化呼吸鏈功能異常，氧自由基過量積累，極易形成氧化應(yīng)激，它是引起神經(jīng)退行性疾病、腫瘤及諸多慢性病癥的重要原因?；赑HB動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)線粒體功能穩(wěn)定與細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)緊密相關(guān)，PHB正逐步成為研究多種細(xì)胞增強(qiáng)氧化應(yīng)激耐受作用的熱點(diǎn)蛋白。然而PHB家族之一

2、的PHB2與處于氧化應(yīng)激環(huán)境中七鰓鰻適應(yīng)性的關(guān)系，目前尚無人研究。本論文以七鰓鰻PHB2蛋白在組織、細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用和機(jī)制為著眼點(diǎn)開展研究，有助于七鰓鰻PHB2蛋白功能的揭示，為闡述人PHB2在氧化應(yīng)激中作用機(jī)制的演化提供了線索。
　　本研究利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測了七鰓鰻Lm-PHB2蛋白在鰓和腎細(xì)胞中的定位，利用阿霉素注射和H2O2刺激的方法分別構(gòu)建七鰓鰻氧化應(yīng)激動(dòng)物模型和人正常細(xì)胞的氧化應(yīng)激模型，通過QPCR和Western

3、 blot的方法檢測了Lm-PHB2在氧化應(yīng)激刺激前后各組織中的分布和表達(dá)，通過外加蛋白孵育細(xì)胞和構(gòu)建真核表達(dá)載體及細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，利用MTT法分析了重組蛋白rLm-PHB2和真核表達(dá)蛋白Lm-PHB2在人張氏肝細(xì)胞和肺上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用，利用激光共聚焦顯微鏡觀察了氧化應(yīng)激條件下Lm-PHB2在人張氏肝細(xì)胞中的定位遷移，利用QPCR法分析了氧化應(yīng)激條件下Lm-PHB2與VDAC3和TP53之間的表達(dá)關(guān)系。結(jié)果表明，Lm-PHB2

4、主要定位在線粒體和細(xì)胞核;Lm-PHB2在七鰓鰻的主要組織中均有表達(dá)，且它的表達(dá)與組織細(xì)胞的氧化應(yīng)激密切相關(guān);rLm-PHB2能夠增加人張氏肝細(xì)胞和肺上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激耐受性;Lm-PHB2增強(qiáng)張氏肝細(xì)胞氧化應(yīng)激耐受性與其從細(xì)胞核向線粒體的定位遷移緊密相關(guān);氧化應(yīng)激條件下Lm-PHB2與VDAC3和TP53在不同組織中表現(xiàn)出不同的表達(dá)關(guān)系。綜上，七鰓鰻Lm-PHB2能夠增強(qiáng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激耐受性，在人張氏肝細(xì)胞中很可能是通過蛋白的定位遷移