黑樹莓花色苷的提取及抗氧化性能的研究.pdf

1、黑樹莓（哈瑞特茲，Heritage）是我國大規(guī)模種植和出口的主要品種，也是一種營養(yǎng)豐富的漿果，尤其富含花色苷，可作為天然食藥品起到獨特的保健和疾病預(yù)防功能。花色苷具有優(yōu)異的自由基清除能力，在抗氧化、抗炎、抗腫瘤，降血糖等方面都有應(yīng)用。鑒于黑樹莓在我國具有很高的藥用價值和商業(yè)價值，黑樹莓中花色苷含量優(yōu)于其他顏色樹莓，因此本文選擇黑樹莓作為研究對象。分析黑樹莓的組成成分，計算其花色苷含量、色價，并利用響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝，為科學(xué)提取哈瑞特茲

2、黑樹莓提供理論參考。本文不僅是通過體外抗氧化檢測，還通過黑樹莓在細胞水平抑制氧化應(yīng)激實驗聯(lián)合評價黑樹莓的抗氧化性能，為綜合開發(fā)利用哈瑞特茲黑樹莓提供更加準(zhǔn)確可靠的理論依據(jù)。本課題主要研究工作如下：
　　①以黑樹莓為實驗原料，乙醇-水溶液為提取溶劑，不同乙醇濃度、水浴時間、提取溫度、料液比為變量設(shè)計單因素實驗，并結(jié)合響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝，得到的優(yōu)化參數(shù)為：乙醇濃度33.58%，提取時間66.32 min，料液比6.92 mL/g。以預(yù)

3、測的最佳提取參數(shù)進行實際驗證，得到響應(yīng)面優(yōu)化和實際操作的相對誤差為2.75%。純化后黑樹莓花色苷（BRE）色價為34.13，比純化前提高了15.95倍?；ㄉ蘸繛?56±11 mg/100g，遠高于Bristol黑樹莓（325.5 mg/100g），煙73葡萄（313.9 mg/100g）和黑豆皮（383.6 mg/100g）等花色苷含量。
　?、谕ㄟ^HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對自提取黑樹莓花色苷進行分析，得到以下五種花色苷成分，即

4、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-阿拉伯糖苷(Cyanidin-3-arabinose）、矢車菊素-3-丙二?；咸烟擒眨–yanidin-3-malonylglucoside）、矢車菊素-3-蕓香糖苷（Cyanidin-3-Rutinoside）、矢車菊素-3-（6′′-咖啡酰槐糖苷）-5-葡萄糖苷（Cyanidin-3-(6′′-cafteoyl sophoroside)-5-glucoside），其中矢車菊素-3-葡萄糖苷是黑

5、樹莓中最主要的花色苷成分，占全部花色苷成分的69.32%。這些組成成分是植物中最常見的花色苷，其糖基化基團和?；Y(jié)構(gòu)均具有強抗氧化性。
　?、墼隗w外還原能力、DPPH自由基、ABTS自由基、?OH和O2??清除能力實驗中，黑樹莓花色苷呈現(xiàn)出優(yōu)異的還原能力和自由基清除能力。花色苷在?OH和O2??清除能力的實驗中測得 IC50分別為41.79μg/mL、37.54μg/mL，均優(yōu)于海南蒲桃（IC50分別為151.0±5.0μg/mL

6、，85.0±5.0μg/mL）。在DPPH自由基和ABTS自由基清除能力測定中，它們的IC50分別為14.11μg/mL、14.95μg/mL，遠遠低于黑樹莓酒（IC50分別為130μg/mL，198μg/mL）。黑樹莓花色苷對這4種自由基的清除能力強弱順序為DPPH>ABTS>O2??>?OH。
　?、芨鶕?jù)細胞抗氧化方法（CAA），建立一個環(huán)氧丙酰胺（GA）誘導(dǎo)食管癌 EC-109細胞的氧化損傷模型。從細胞凋亡，還原型谷胱甘肽減

7、少，活性氧釋放，線粒體膜電位變化，細胞核損傷五個方面評價黑樹莓花色苷在細胞內(nèi)的抗氧化性能。實驗表明，環(huán)氧丙酰胺（8 mM）可導(dǎo)致EC-109細胞存活率顯著降低；還原型谷胱甘肽（GSH）消耗增加；細胞核固縮、破碎，甚至形成凋亡小體；活性氧（ROS）激增；線粒體膜電位（MPP）下降。然而黑樹莓花色苷（10μg/mL、40μg/mL、80μg/mL）前處理能明顯降低環(huán)氧丙酰胺誘導(dǎo)的細胞死亡；抑制GSH的消耗；大大減少ROS的產(chǎn)生；修復(fù)細胞線粒