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文檔簡介
1、黑樹莓(哈瑞特茲,Heritage)是我國大規(guī)模種植和出口的主要品種,也是一種營養(yǎng)豐富的漿果,尤其富含花色苷,可作為天然食藥品起到獨特的保健和疾病預(yù)防功能。花色苷具有優(yōu)異的自由基清除能力,在抗氧化、抗炎、抗腫瘤,降血糖等方面都有應(yīng)用。鑒于黑樹莓在我國具有很高的藥用價值和商業(yè)價值,黑樹莓中花色苷含量優(yōu)于其他顏色樹莓,因此本文選擇黑樹莓作為研究對象。分析黑樹莓的組成成分,計算其花色苷含量、色價,并利用響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝,為科學(xué)提取哈瑞特茲
2、黑樹莓提供理論參考。本文不僅是通過體外抗氧化檢測,還通過黑樹莓在細胞水平抑制氧化應(yīng)激實驗聯(lián)合評價黑樹莓的抗氧化性能,為綜合開發(fā)利用哈瑞特茲黑樹莓提供更加準(zhǔn)確可靠的理論依據(jù)。本課題主要研究工作如下:
①以黑樹莓為實驗原料,乙醇-水溶液為提取溶劑,不同乙醇濃度、水浴時間、提取溫度、料液比為變量設(shè)計單因素實驗,并結(jié)合響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝,得到的優(yōu)化參數(shù)為:乙醇濃度33.58%,提取時間66.32 min,料液比6.92 mL/g。以預(yù)
3、測的最佳提取參數(shù)進行實際驗證,得到響應(yīng)面優(yōu)化和實際操作的相對誤差為2.75%。純化后黑樹莓花色苷(BRE)色價為34.13,比純化前提高了15.95倍?;ㄉ蘸繛?56±11 mg/100g,遠高于Bristol黑樹莓(325.5 mg/100g),煙73葡萄(313.9 mg/100g)和黑豆皮(383.6 mg/100g)等花色苷含量。
?、谕ㄟ^HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對自提取黑樹莓花色苷進行分析,得到以下五種花色苷成分,即
4、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-阿拉伯糖苷(Cyanidin-3-arabinose)、矢車菊素-3-丙二?;咸烟擒眨–yanidin-3-malonylglucoside)、矢車菊素-3-蕓香糖苷(Cyanidin-3-Rutinoside)、矢車菊素-3-(6′′-咖啡酰槐糖苷)-5-葡萄糖苷(Cyanidin-3-(6′′-cafteoyl sophoroside)-5-glucoside),其中矢車菊素-3-葡萄糖苷是黑
5、樹莓中最主要的花色苷成分,占全部花色苷成分的69.32%。這些組成成分是植物中最常見的花色苷,其糖基化基團和?;Y(jié)構(gòu)均具有強抗氧化性。
?、墼隗w外還原能力、DPPH自由基、ABTS自由基、?OH和O2??清除能力實驗中,黑樹莓花色苷呈現(xiàn)出優(yōu)異的還原能力和自由基清除能力。花色苷在?OH和O2??清除能力的實驗中測得 IC50分別為41.79μg/mL、37.54μg/mL,均優(yōu)于海南蒲桃(IC50分別為151.0±5.0μg/mL
6、,85.0±5.0μg/mL)。在DPPH自由基和ABTS自由基清除能力測定中,它們的IC50分別為14.11μg/mL、14.95μg/mL,遠遠低于黑樹莓酒(IC50分別為130μg/mL,198μg/mL)。黑樹莓花色苷對這4種自由基的清除能力強弱順序為DPPH>ABTS>O2??>?OH。
?、芨鶕?jù)細胞抗氧化方法(CAA),建立一個環(huán)氧丙酰胺(GA)誘導(dǎo)食管癌 EC-109細胞的氧化損傷模型。從細胞凋亡,還原型谷胱甘肽減
7、少,活性氧釋放,線粒體膜電位變化,細胞核損傷五個方面評價黑樹莓花色苷在細胞內(nèi)的抗氧化性能。實驗表明,環(huán)氧丙酰胺(8 mM)可導(dǎo)致EC-109細胞存活率顯著降低;還原型谷胱甘肽(GSH)消耗增加;細胞核固縮、破碎,甚至形成凋亡小體;活性氧(ROS)激增;線粒體膜電位(MPP)下降。然而黑樹莓花色苷(10μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)前處理能明顯降低環(huán)氧丙酰胺誘導(dǎo)的細胞死亡;抑制GSH的消耗;大大減少ROS的產(chǎn)生;修復(fù)細胞線粒
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