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文檔簡介
1、本文以柿葉為原料,研究了柿葉中黃酮類化合物的提取、純化工藝及抗氧化活性。研究比較了不同提取方法下柿葉黃酮的提取得率,并利用響應(yīng)曲面法對提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化,最終確定應(yīng)用超聲波輔助提取、微波輔助提取、超聲-微波聯(lián)合輔助提取三種提取方法,柿葉總黃酮的提取得率分別達(dá)到5.58%、6.09%、6.38%。而后運用多種方法對提取出的黃酮類化合物進(jìn)行了純化研究,通過大孔樹脂富集可以使黃酮純度提高1.78倍,再經(jīng)過聚酰胺樹脂純化純度進(jìn)一步提高了0.56
2、倍,最后應(yīng)用逆流色譜進(jìn)行分離得到了三個組分.并以總抗氧化能力與清除過氧化氫能力為指標(biāo)考察了三個組分的抗氧化活性。主要研究結(jié)果如下:
1、柿葉黃酮提取工藝條件研究
柿葉黃酮提取在單因素試驗的基礎(chǔ)上,應(yīng)用響應(yīng)曲面法優(yōu)化了超聲輔助提取、微波輔助提取及超聲-微波聯(lián)合提取的工藝。
響應(yīng)曲面法采用Box-Behnken設(shè)計方案建立了柿葉黃酮提取得率的二次多項式數(shù)學(xué)模型,通過計算得到各提取方法的最佳工藝參數(shù),
3、并對模型進(jìn)行了驗證,選取的條件分別為:超聲波輔助提取溫度80.5℃、超聲波功率600W、乙醇濃度70.0%、液料比22:1,黃酮的得率為5.58%;微波輔助提?。何⒉üβ?25W、提取時間為20min、液料比20:1,黃酮的得率為6.09%。超聲.微波聯(lián)合提?。何⒉üβ?30W、超聲波功率590W提取時間為20min、液料比20:1,黃酮的得率為6.38%。
通過比較得知提取得率最高的方法是超聲-微波聯(lián)合提取,其次是微波輔
4、助提取,再次是超聲輔助提取。
2、柿葉黃酮純化方法的研究
采用大孔樹脂對提取出的黃酮進(jìn)行初步純化。通過靜態(tài)吸附試驗考察10種不同性質(zhì)的大孔樹脂對柿葉黃酮的吸附與解吸能力篩選樹脂,最終確定NKA-2大孔樹脂為純化柿葉黃酮較理想的樹脂。并對NKA-2樹脂純化黃酮的條件進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化的工藝分為靜態(tài)吸附與動態(tài)吸附兩部分試驗。靜態(tài)吸附試驗主要考察樣液pH值、吸附時間、解吸乙醇的濃度的影響;動態(tài)吸附試驗主要從上樣濃度、上
5、樣流速、上樣量、洗脫流速、洗脫終點等方面進(jìn)行考察。最終得到最佳工藝條件為:以4mg/mL的濃度(溶液pH=3)、2BV/h的速率5BV上樣,以5BV的70%乙醇、2BV/h的速率洗脫。經(jīng)NKA-2大孔樹脂處理后的柿葉總黃酮可達(dá)52%,純度提高了1.78倍。
對經(jīng)大孔樹脂富集的柿葉黃酮采用聚酰胺樹脂進(jìn)一步純化,并對純化工藝進(jìn)行優(yōu)化。通過靜態(tài)吸附試驗考察聚酰胺樹脂對柿葉黃酮的飽和吸附容量和解吸率;通過動態(tài)吸附試驗優(yōu)化聚酰胺樹脂
6、的純化工藝,優(yōu)化參數(shù)為:樣液濃度、上樣流速、上樣量、洗脫乙醇的體積、濃度,洗脫流速等。所得最佳工藝參數(shù)為:聚酰胺樹脂對柿葉黃酮靜態(tài)吸附的飽和吸附容量為126.7mg/g,解吸率為90.2%;動態(tài)吸附條件以36.6mg/ml的濃度,上樣流速為1BV/h,上樣量為2BV,洗脫工藝為以8BV,80%的乙醇洗脫,洗脫流速為1BV/h。按此工藝參數(shù)經(jīng)聚酰胺樹脂純化后,最終得到柿葉總黃酮可達(dá)83.1%,純度提高了0.56倍。
3、采用
7、高速逆流色譜對柿葉黃酮進(jìn)一步分離純化
對經(jīng)聚酰胺樹脂純化的黃酮,采用高速逆流色譜進(jìn)一步分離。高速逆流色譜分離比較了四種不同溶劑體系的分離效果:通過比較分層時間、上下相體積比對溶劑系統(tǒng)進(jìn)行初步篩選,再采用分析型逆流色譜對溶劑體系進(jìn)行快速篩選,最終確定以正己烷:乙酸乙酯;甲醇:水1:0.6:0.6:1的體系對此黃酮類化合物進(jìn)行分離。并應(yīng)用制備型逆流色譜對分離條件進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化,分別測定主機(jī)轉(zhuǎn)速在750~950r/min時的固定
8、相保留率:柱溫分別為15~35℃時固定相保留率以及不同上樣濃度下的分離效果,最終確定的最佳操作參數(shù)為轉(zhuǎn)速800r/min,柱溫30℃、上樣濃度24mg/ml、檢測波長214nm,按此條件應(yīng)用高速逆流色譜對柿葉黃酮類化合物進(jìn)行分離,可得到三個組分。經(jīng)高效液相色譜檢測組分1含有三種物質(zhì),組分2含有兩種物質(zhì),組分3較純。
4、抗氧化活性研究
分別考察了三個組分的總抗氧化能力與清除過氧化氫的能力,結(jié)果表明組分1、2的
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