柿黃酮的提取、純化及抗氧化性研究.pdf

1、本文以柿葉為原料，研究了柿葉中黃酮類化合物的提取、純化工藝及抗氧化活性。研究比較了不同提取方法下柿葉黃酮的提取得率，并利用響應曲面法對提取工藝進行了優(yōu)化，最終確定應用超聲波輔助提取、微波輔助提取、超聲-微波聯(lián)合輔助提取三種提取方法，柿葉總黃酮的提取得率分別達到5.58％、6.09％、6.38％。而后運用多種方法對提取出的黃酮類化合物進行了純化研究，通過大孔樹脂富集可以使黃酮純度提高1.78倍，再經(jīng)過聚酰胺樹脂純化純度進一步提高了0.56

2、倍，最后應用逆流色譜進行分離得到了三個組分.并以總抗氧化能力與清除過氧化氫能力為指標考察了三個組分的抗氧化活性。主要研究結果如下：
　　 1、柿葉黃酮提取工藝條件研究
　　 柿葉黃酮提取在單因素試驗的基礎上，應用響應曲面法優(yōu)化了超聲輔助提取、微波輔助提取及超聲-微波聯(lián)合提取的工藝。
　　 響應曲面法采用Box-Behnken設計方案建立了柿葉黃酮提取得率的二次多項式數(shù)學模型，通過計算得到各提取方法的最佳工藝參數(shù)，

3、并對模型進行了驗證，選取的條件分別為：超聲波輔助提取溫度80.5℃、超聲波功率600W、乙醇濃度70.0％、液料比22:1，黃酮的得率為5.58％；微波輔助提?。何⒉üβ?25W、提取時間為20min、液料比20:1，黃酮的得率為6.09％。超聲.微波聯(lián)合提?。何⒉üβ?30W、超聲波功率590W提取時間為20min、液料比20:1，黃酮的得率為6.38％。
　　 通過比較得知提取得率最高的方法是超聲-微波聯(lián)合提取，其次是微波輔

4、助提取，再次是超聲輔助提取。
　　 2、柿葉黃酮純化方法的研究
　　 采用大孔樹脂對提取出的黃酮進行初步純化。通過靜態(tài)吸附試驗考察10種不同性質(zhì)的大孔樹脂對柿葉黃酮的吸附與解吸能力篩選樹脂，最終確定NKA-2大孔樹脂為純化柿葉黃酮較理想的樹脂。并對NKA-2樹脂純化黃酮的條件進行優(yōu)化，優(yōu)化的工藝分為靜態(tài)吸附與動態(tài)吸附兩部分試驗。靜態(tài)吸附試驗主要考察樣液pH值、吸附時間、解吸乙醇的濃度的影響；動態(tài)吸附試驗主要從上樣濃度、上

5、樣流速、上樣量、洗脫流速、洗脫終點等方面進行考察。最終得到最佳工藝條件為：以4mg/mL的濃度(溶液pH=3)、2BV/h的速率5BV上樣，以5BV的70％乙醇、2BV/h的速率洗脫。經(jīng)NKA-2大孔樹脂處理后的柿葉總黃酮可達52％，純度提高了1.78倍。
　　 對經(jīng)大孔樹脂富集的柿葉黃酮采用聚酰胺樹脂進一步純化，并對純化工藝進行優(yōu)化。通過靜態(tài)吸附試驗考察聚酰胺樹脂對柿葉黃酮的飽和吸附容量和解吸率；通過動態(tài)吸附試驗優(yōu)化聚酰胺樹脂

6、的純化工藝，優(yōu)化參數(shù)為：樣液濃度、上樣流速、上樣量、洗脫乙醇的體積、濃度，洗脫流速等。所得最佳工藝參數(shù)為：聚酰胺樹脂對柿葉黃酮靜態(tài)吸附的飽和吸附容量為126.7mg/g，解吸率為90.2％；動態(tài)吸附條件以36.6mg/ml的濃度，上樣流速為1BV/h，上樣量為2BV，洗脫工藝為以8BV，80％的乙醇洗脫，洗脫流速為1BV/h。按此工藝參數(shù)經(jīng)聚酰胺樹脂純化后，最終得到柿葉總黃酮可達83.1％，純度提高了0.56倍。
　　 3、采用

7、高速逆流色譜對柿葉黃酮進一步分離純化
　　 對經(jīng)聚酰胺樹脂純化的黃酮，采用高速逆流色譜進一步分離。高速逆流色譜分離比較了四種不同溶劑體系的分離效果：通過比較分層時間、上下相體積比對溶劑系統(tǒng)進行初步篩選，再采用分析型逆流色譜對溶劑體系進行快速篩選，最終確定以正己烷：乙酸乙酯；甲醇：水1:0.6:0.6:1的體系對此黃酮類化合物進行分離。并應用制備型逆流色譜對分離條件進行進一步優(yōu)化，分別測定主機轉(zhuǎn)速在750～950r/min時的固定

8、相保留率：柱溫分別為15～35℃時固定相保留率以及不同上樣濃度下的分離效果，最終確定的最佳操作參數(shù)為轉(zhuǎn)速800r/min，柱溫30℃、上樣濃度24mg/ml、檢測波長214nm，按此條件應用高速逆流色譜對柿葉黃酮類化合物進行分離，可得到三個組分。經(jīng)高效液相色譜檢測組分1含有三種物質(zhì)，組分2含有兩種物質(zhì)，組分3較純。
　　 4、抗氧化活性研究
　　 分別考察了三個組分的總抗氧化能力與清除過氧化氫的能力，結果表明組分1、2的