新型生物材料[PEAD：肝素]包裹FGF2對(duì)C57BL-6小鼠皮膚創(chuàng)面愈合作用研究.pdf

1、背景與目的:創(chuàng)面愈合是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，依賴(lài)于多種細(xì)胞因子、酶及細(xì)胞的共同協(xié)調(diào)。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)己被證明有加速創(chuàng)面愈合的作用，但其缺點(diǎn)是半衰期較短，需頻繁給藥，因此具備緩釋功能的新型藥物遞送系統(tǒng)急需被開(kāi)發(fā)。本研究旨在以前期開(kāi)發(fā)的一種以肝素為基礎(chǔ)的、具有生物活性的聚陽(yáng)離子來(lái)控制釋放FGF2，增強(qiáng)其生物活性，評(píng)價(jià)聚合物肝素-FGF2@PEAD對(duì)小鼠皮膚急性損傷的修復(fù)作用。
　　方法:制備肝素-FGF2@PEAD藥物遞送

2、系統(tǒng)，通過(guò)Western blot檢測(cè)FGF2的包載量，利用掃描電鏡觀察其內(nèi)部形態(tài)，以及通過(guò)ELISA研究藥物遞送系統(tǒng)對(duì)FGF2的釋放。
　　建立C57BL/6小鼠皮膚全層切除創(chuàng)傷模型。4％水合氯醛(0.01 ml/g)腹腔注射麻醉，剃去老鼠背部毛發(fā)，并用脫毛膏去除干凈。采用圓形皮膚打孔器在其背部做兩個(gè)直徑為6 mm的創(chuàng)面，剖面用環(huán)形膠圈固定(內(nèi)徑8 mm，外徑16 mm，厚度0.5 mm)，防止皮膚由于皺縮而愈合。
　　為

3、防止藥物交叉影響，每只動(dòng)物的創(chuàng)面給予相同處理。動(dòng)物隨機(jī)分為四組，分別是對(duì)照組（生理鹽水）、空白載體組（肝素@PEAD）、單純FGF2組和FGF2團(tuán)聚體組（肝素-FGF2@PEAD），單劑量（1.6μg FGF2/創(chuàng)面，給藥體積為10μl）給藥。分別在第0、7、10、14、17天測(cè)量創(chuàng)面面積。創(chuàng)面愈合率(％)=（造模第一天創(chuàng)面面積-取材日創(chuàng)面面積）/造模第一天創(chuàng)面面積×100％。藥物干預(yù)7天后，取皮膚組織（每組4個(gè)組織）:17天后，處死剩

4、余動(dòng)物，取皮膚組織，包埋切片。HE染色、馬森染色評(píng)價(jià)組織形態(tài)變化以及膠原的產(chǎn)生;免疫組化法檢測(cè)組織中細(xì)胞角蛋白、PCNA和VEGF的表達(dá);免疫熒光法檢測(cè)組織中CD31和α-SMA的表達(dá)，評(píng)價(jià)血管再生。
　　結(jié)果:
　　1.體外實(shí)驗(yàn)表明，新型藥物遞送系統(tǒng)包載10μg FGF2，在上清中檢測(cè)到的FGF2幾乎可以忽略不計(jì)，包載率為93％。掃描電鏡結(jié)果顯示，肝素@PEAD內(nèi)部形態(tài)呈絲綢狀。FGF2可從團(tuán)聚體中緩慢釋放，第一天釋放率為

5、13.2±0.7％，持續(xù)到第17天時(shí)，共計(jì)有56.1±3.4％ FGF2釋放。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，肝素-FGF2@PEAD可以加速小鼠皮膚創(chuàng)面愈合。在第7天時(shí)，生理鹽水組、肝素@PEAD組和單純FGF2組愈合率相近，分別是14.5±4.1％、14.2±7.0％、13.8±3.3％，肝素-FGF2@PEAD愈合速度最快，可加速創(chuàng)面愈合。在第17天時(shí)，與生理鹽水組(72.9±4.6％)、肝素@PEAD組(76.4±10.8％)和單

6、純FGF2組(78.2±6.7％)相比，肝素-FGF2@PEAD組（98.2±2.6％）創(chuàng)面愈合效果最好。
　　3.蘇木精-伊紅染色和馬森染色表明肝素-FGF2@PEAD通過(guò)促進(jìn)傷口肉芽組織形成和膠原沉積，促使創(chuàng)面再上皮化發(fā)生，加速創(chuàng)面愈合。
　　4.免疫組化結(jié)果表明肝素-FGF2@PEAD組中細(xì)胞角蛋白表達(dá)升高，PCNA的表達(dá)增加，VEGF的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)傷口部位細(xì)胞增殖和組織修復(fù)。
　　5.免疫熒光結(jié)果表明肝素-F