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1、目的:考察重組人IgE Fc對(duì)由IgE介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)是否具有抑制作用以及其作為臨床抗過(guò)敏藥物的潛力。
方法:通過(guò)基因工程技術(shù),獲得表達(dá)重組人IgE Fc的CHO細(xì)胞株,建立CHO細(xì)胞培養(yǎng)工藝和重組人IgE Fc的分離純化工藝制備重組人IgE Fc的純化樣品,并應(yīng)用于功能評(píng)價(jià)研究。在體外試驗(yàn)中,利用流式細(xì)胞方法分析檢測(cè)重組人IgE Fc與表達(dá)人 FcεRIα的CHO細(xì)胞(CHO3D10)的結(jié)合考察重組人IgE Fc與FcεRI的
2、親和力,并與人源IgE進(jìn)行比較。轉(zhuǎn)人基因的大鼠細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞(EG-RBL2H3)活化試驗(yàn)中,通過(guò)檢測(cè)組胺釋放量的變化考察重組人IgE Fc對(duì)過(guò)敏原/特異IgE引發(fā)嗜堿性粒細(xì)胞活化的抑制作用。最后,在猴體上,通過(guò)檢測(cè)藍(lán)斑大小的變化,評(píng)估重組人IgE Fc對(duì)IgE介導(dǎo)的被動(dòng)皮膚過(guò)敏(Passive Cutaneous Anaphylaxis,PCA)反應(yīng)的抑制作用。
結(jié)果:構(gòu)建并獲得30株高表達(dá)重組人IgE Fc的CHO細(xì)胞克
3、隆株;對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行了優(yōu)化,通過(guò)濃縮培養(yǎng)基的流加,重組人IgE Fc的表達(dá)滴度比分批培養(yǎng)提高了83.8%;在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期結(jié)束時(shí)降低培養(yǎng)溫度到32℃,重組人IgE Fc的表達(dá)滴度進(jìn)一步增加了18%;建立了由陰離子交換和疏水層析為主的分離純化工藝,產(chǎn)物的最終純度達(dá)到98%。流式分析結(jié)果表明重組人IgE Fc與FcεRI的親和力高于人IgE;EG-RBL2H3細(xì)胞活化試驗(yàn)中,當(dāng)重組人IgE Fc濃度達(dá)到致敏NP-IgE濃度的5倍時(shí),組胺釋放
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