TrkB-BDNF信號(hào)通過SIRT1負(fù)向調(diào)控p53-Unc5H4表達(dá)介導(dǎo)NB細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥.pdf

1、目的:
　　神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童最常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著兒童的健康和生命，是基礎(chǔ)研究和臨床治療亟待解決的難題之一。目前手術(shù)結(jié)合化療、放療仍為NB治療的三大主要手段，但治療效果不佳，其中耐藥復(fù)發(fā)是導(dǎo)致NB患者死亡的主要原因。因此闡明NB多藥耐藥機(jī)制對(duì)提高患者的治療效果具有極其重大的意義。本實(shí)驗(yàn)以入神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞系為研究對(duì)象，利用全反式維甲酸(all trans-retinoic

2、acid，ATRA)誘導(dǎo)酪氨酸激酶受體B(tyrosine kinasereceptor B，TrkB)高表達(dá)，使用腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophicfactor，BDNF）刺激，檢測(cè)SIRT1、p53、ac-p53、Unc5H4蛋白表達(dá)水平以及細(xì)胞對(duì)化療藥物順鉑(cisplatin，CDDP)敏感性的變化;通過SIRT1抑制劑尼克酰胺(nicotinamide，NAM)干預(yù)，靶向抑制SIRT1的表

3、達(dá)和活性，檢測(cè)p53、ac-p53、Unc5H4表達(dá)變化以及細(xì)胞對(duì)CDDP敏感性的變化。
　　研究方法:
　　常規(guī)培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞系，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞利用ATRA誘導(dǎo)TrkB高表達(dá)，根據(jù)分組要求依次加入NAM、BDNF、CDDP處理。具體分組如下:Western blot實(shí)驗(yàn):A:對(duì)照組;B: ATRA+BDNF組;C:ATRA+NAM+BDNF組，檢測(cè)各組TrkB、SIRT1、p53、ac-p53、Un

4、c5H4蛋白表達(dá)水平變化。MTT比色法、流式細(xì)胞術(shù):A:對(duì)照組;B: CDDP組;C:ATRA+BDNF+CDDP組;D: ATRA+NAM+BDNF+CDDP組，MTT比色法檢測(cè)加入CDDP后0h、24h、48h各組細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)加入CDDP后24h細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　Western blot實(shí)驗(yàn):與A組細(xì)胞相比，B組細(xì)胞TrkB、SIRT1蛋白表達(dá)明顯增加(P＜0.05)，p53、ac-p53及Un

5、c5H4蛋白表達(dá)明顯減少(P＜0.05);與A、B組細(xì)胞相比，C組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，p53、ac-p53及Unc5H4表達(dá)明顯增加(P＜0.05)。MTT比色法、流式細(xì)胞術(shù):與A組細(xì)胞相比，B、C、D組細(xì)胞存活率明顯降低(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯增加(P＜0.05);與B組細(xì)胞相比，C組細(xì)胞存活率明顯增加(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯降低(P＜0.05);與B、C組相比，D組細(xì)胞存活率明顯降低(P＜