siRNA沉默TGF-β1基因表達對肺癌順鉑耐藥細胞的影響.pdf

1、目的:國內(nèi)外研究及本課題前期實驗均證實腫瘤耐藥性的產(chǎn)生與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchymal transition，EMT)之間具有相關(guān)性。本實驗以EMT主要調(diào)控因子——轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)為切入點，探討TGF-β1小干擾RNA(Small interfering RNA， siRNA)對A549順鉑耐藥細胞(A549/DDP)耐藥性的影響，進一步了解肺癌細胞順鉑耐藥性的發(fā)生機制，并從EMT的角

2、度尋找耐藥性腫瘤治療的新思路。
　　方法:設(shè)計TGF-β1 siRNA基因片段，利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染A549/DDP細胞，采用RT-PCR、免疫細胞化學觀察轉(zhuǎn)染前后A549/DDP細胞EMT表型標記物E-cadherin、vimentin以及耐藥蛋白ERCC1mRNA及蛋白表達情況，CCK-8法檢測各組細胞再次添加順鉑后增殖活性變化及化療藥物的敏感性變化。
　　結(jié)果:
　　1.與A549細胞相比，A549/DDP細胞呈長梭形

3、、排列呈旋渦狀或放射狀，類似纖維細胞;免疫細胞化學顯示細胞的上皮標志物E—cadherin表達下調(diào)，間質(zhì)標志物vimentin表達上調(diào)，這些都與EMT發(fā)生時的典型特征相符合。
　　2.TGF-β1 siRNA轉(zhuǎn)染后，RT-PCR及免疫細胞化學均觀察到A549/DDP細胞E-cadherin表達增強，vimentin表達下調(diào)，并且耐藥因子ERCC1 mRNA及蛋白表達下調(diào)。
　　3.CCK-8法檢測各組細胞耐藥指數(shù)及再次添加順

4、鉑后的生長活性變化，結(jié)果顯示A549/DDP細胞耐藥指數(shù)2.77，而A549/A549/DDP轉(zhuǎn)染組細胞耐藥指數(shù)1.28，兩組具有顯著差異性(P=0.000);且A549/DDP轉(zhuǎn)染組與A549/DDP細胞相比，在添加順鉑24h、48h及72h后抑制率均明顯升高(P=0.000)，而轉(zhuǎn)染陰性對照組未見明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.A549/DDP細胞在獲得耐藥性的同時呈現(xiàn)EMT，TGF-β1 siRNA轉(zhuǎn)染