鮮馬乳乳清蛋白質(zhì)組成及其抗氧化肽的分離純化研究.pdf

1、目的：采用柱色譜和SDS-PAGE電泳分離和鑒定馬乳、牛乳、驢乳、駝乳乳清蛋白組成差異，并分離純化鮮馬乳乳源性生物活性肽，初步檢測其生物活性，為鮮馬乳功能研究提供依據(jù)。
　　方法：(1)將四種鮮乳高速離心，分離乳清蛋白，采用離子交換層析和SDS-PAGE電泳方法，對四種不同鮮乳乳清蛋白組分進(jìn)行鑒別，揭示其差異蛋白。(2)鮮馬乳乳清蛋白酶解液分別用3Kd、10Kd、30Kd的超濾管進(jìn)行富集并檢測其抗氧化活性；選擇活性較強(qiáng)的肽段采用S

2、ephadexG-75和RP-HPLC進(jìn)行純化， MALDI-TOF/TOF進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，獲得抗氧化活性肽。(3)采用MTT法測定鮮馬乳抗氧化肽對人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549增殖的抑制作用，流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞周期和凋亡，通過檢測GSH、SOD、MDA指標(biāo)，揭示其氧抗氧化能力。
　　結(jié)果：(1)鮮馬乳蛋白與鮮牛乳蛋白組分相比較，發(fā)現(xiàn)其中存在三種已知蛋白，分子質(zhì)量分別為69.60KD、46.22KD和26.35KD；與鮮驢乳蛋白組分相比較，

3、發(fā)現(xiàn)其中存在三種已知蛋白，分子質(zhì)量分別為100.92KD、69.60KD和76.31KD；與鮮駝乳蛋白組分相比較，發(fā)現(xiàn)其中存在四種已知蛋白，分子質(zhì)量分別為100.92KD、95.56KD、26.35KD和76.31KD。(2)馬乳乳清酶解物經(jīng)過超濾、Sephadex G-75葡聚糖凝和半制備RP-HPLC分離純化， MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜結(jié)構(gòu)鑒定，初步確定抗氧化肽的分子量為1594.89KD，氨基酸組成為VAPFPQPVVPYP

4、QR。(3)MTT法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗氧化肽能抑制A549細(xì)胞增殖，將其阻滯在G1期，明顯提高細(xì)胞凋亡，與模型組對比抗氧化肽高、中劑量組增加GSH含量和SOD的活力，降低MDA的分泌量，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論:(1)通過檢測發(fā)現(xiàn)，鮮馬乳與駝乳、驢乳、牛乳乳清蛋白組成具有一定的差異性。(2)通過分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定獲得分子量為1594.89 KD，氨基酸組成為VAPFPQPVVPYPQR的鮮馬乳乳源性抗氧化