轉(zhuǎn)錄因子E2F1調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)影響小鼠皮膚創(chuàng)面愈合.pdf

1、目的：通過同背景E2F1基因敲出鼠（E2F1-/-）與野生型老鼠（WT）創(chuàng)面愈合情況的比較，及兩組間同一時間段創(chuàng)緣 VEGF表達(dá)量變化的比較，探索E2F1與創(chuàng)面愈合是否相關(guān)。
　　方法：于同背景E2F1基因敲出鼠（E2F1-/-）與野生型老鼠（WT）背部切取9mm創(chuàng)面，正常飲食，單籠飼養(yǎng)。分別記錄不同愈合時段（0天、3天、7天、10天、14天）創(chuàng)面愈合情況，并計算創(chuàng)面愈合率，比較兩組創(chuàng)面愈合速度的差別；石蠟包埋HE染色觀察并計算E

2、2F1-/-組和 WT組皮膚創(chuàng)面真皮厚度的差別；Masson染色觀察并統(tǒng)計E2F1-/-組和 WT組創(chuàng)面皮膚膠原沉積的情況是否有差別。CD31免疫組織化學(xué)染色觀察創(chuàng)緣增殖血管的數(shù)量；Tunel熒光染色（綠色）+ CD31（紅色）免疫熒光染色，觀察并統(tǒng)計 E2F1-/-組與WT組血管凋亡的情況；免疫組織化學(xué)染色（CD68,MPO,CD3）觀察創(chuàng)面炎細(xì)胞（中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞， T細(xì)胞）浸潤情況。對創(chuàng)緣VEGF免疫組化染色，通過Wester

3、n blot檢測VEGF蛋白表達(dá)，通過RT-PCR檢測VEGFmRNA的表達(dá)，觀察VEGF在E2F1-/-組和 WT組兩組間表達(dá)是否有差別。
　　結(jié)果：E2F1-/-組創(chuàng)面愈合率明顯優(yōu)于WT組；HE染色后E2F1-/-組真皮厚度明顯優(yōu)于 WT組；在對創(chuàng)面組織進(jìn)行 CD31免疫組織化學(xué)的染色中，可見E2F1-/-組新生血管數(shù)量明顯多于WT組；通過Tunel熒光染色（綠色）+CD31（紅色）免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)E2F1-/-組血管凋亡的