瑞巴派特對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的H2O2誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞凋亡的作用.pdf

1、目的：探討在過氧化氫（H2O2）介導(dǎo)人胃粘膜上皮細(xì)胞（GES-1）凋亡的過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所起的作用，以及瑞巴派特對(duì)該凋亡過程的影響以及其可能機(jī)制。
　　方法：將 GES-1作為研究對(duì)象，培養(yǎng)并創(chuàng)建體外單層細(xì)胞模型。將細(xì)胞分成陰性對(duì)照組、H2O2組以及瑞巴派特聯(lián)合H2O2組（400umol/L瑞巴派特預(yù)處理2h），用不同濃度過氧化氫作用不同時(shí)間，用倒置顯微鏡觀測(cè)各組細(xì)胞的形態(tài)變化；用MTT法探測(cè)GES-1細(xì)胞的生長(zhǎng)活力；選用流式細(xì)胞

2、儀探測(cè)每組細(xì)胞發(fā)生凋亡的情況；采用Western blot法測(cè)定GES-1細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CHOP以及GRP78表達(dá)的變化情況。實(shí)驗(yàn)所得資料均用統(tǒng)計(jì)學(xué)應(yīng)用軟件SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析, P﹤0.05則認(rèn)為差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．隨著 H2O2濃度及作用時(shí)間增加，GES-1細(xì)胞形態(tài)逐漸出現(xiàn)變化，細(xì)胞皺縮、間隙變大、脫落甚至死亡。在 H2O2聯(lián)合瑞巴派特組，細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化與H2O2組相比較小。

3、>　　2. MTT實(shí)驗(yàn)顯示，GES-1細(xì)胞的吸光度值隨著H2O2作用濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低（P<0.05）。相同作用條件下，瑞巴派特預(yù)處理組的GES-1的吸光度值高于H2O2組。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定GES-1細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，100umol/L的H2O2作用較短時(shí)間（6h），對(duì)照組、H2O2組以及瑞巴派特聯(lián)合 H2O2組的凋亡率各自是0.66％±0.09%、41.71%±1.36%和19.88%±1.16%（P﹤0.

4、05）。當(dāng)100umol/L H2O2作用較長(zhǎng)時(shí)間（16h），對(duì)照組的凋亡率為1.27%±0.25%，而 H2O2組和瑞巴派特聯(lián)合 H2O2組的凋亡率分別為47.32%±1.25%和10.80%±0.96%（P﹤0.05）。另外，與6h組相比較，16h組引起的GES-1細(xì)胞凋亡主要為晚期凋亡和/或壞死。4. GES-1細(xì)胞加入100umol/L的H2O2作用12h后，Western blot法探測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性蛋白CHOP和GRP78

5、在各個(gè)組中的表達(dá)，其中和對(duì)照組相比H2O2組中CHOP和GRP78蛋白表達(dá)增加，而瑞巴派特聯(lián)合H2O2組中的CHOP和GRP78蛋白表達(dá)較H2O2組減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. H2O2可抑制GES-1細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，細(xì)胞的生長(zhǎng)活力隨著H2O2濃度升高和作用時(shí)間增加而減弱，瑞巴派特對(duì)此過程中 GES-1的正常生長(zhǎng)有保護(hù)作用。
　　2. GES-1細(xì)胞在短時(shí)間低濃度的H2O2（100um