瑞巴派特對內質網應激介導的H2O2誘導胃上皮細胞凋亡的作用.pdf

1、目的：探討在過氧化氫（H2O2）介導人胃粘膜上皮細胞（GES-1）凋亡的過程中內質網應激所起的作用，以及瑞巴派特對該凋亡過程的影響以及其可能機制。
　　方法：將 GES-1作為研究對象，培養(yǎng)并創(chuàng)建體外單層細胞模型。將細胞分成陰性對照組、H2O2組以及瑞巴派特聯(lián)合H2O2組（400umol/L瑞巴派特預處理2h），用不同濃度過氧化氫作用不同時間，用倒置顯微鏡觀測各組細胞的形態(tài)變化；用MTT法探測GES-1細胞的生長活力；選用流式細胞

2、儀探測每組細胞發(fā)生凋亡的情況；采用Western blot法測定GES-1細胞中內質網應激相關蛋白CHOP以及GRP78表達的變化情況。實驗所得資料均用統(tǒng)計學應用軟件SPSS20.0進行數據分析, P﹤0.05則認為差異具統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1．隨著 H2O2濃度及作用時間增加，GES-1細胞形態(tài)逐漸出現(xiàn)變化，細胞皺縮、間隙變大、脫落甚至死亡。在 H2O2聯(lián)合瑞巴派特組，細胞的形態(tài)學變化與H2O2組相比較小。

3、>　　2. MTT實驗顯示，GES-1細胞的吸光度值隨著H2O2作用濃度的增加和時間的延長而逐漸降低（P<0.05）。相同作用條件下，瑞巴派特預處理組的GES-1的吸光度值高于H2O2組。
　　3.流式細胞術測定GES-1細胞凋亡結果顯示，100umol/L的H2O2作用較短時間（6h），對照組、H2O2組以及瑞巴派特聯(lián)合 H2O2組的凋亡率各自是0.66％±0.09%、41.71%±1.36%和19.88%±1.16%（P﹤0.

4、05）。當100umol/L H2O2作用較長時間（16h），對照組的凋亡率為1.27%±0.25%，而 H2O2組和瑞巴派特聯(lián)合 H2O2組的凋亡率分別為47.32%±1.25%和10.80%±0.96%（P﹤0.05）。另外，與6h組相比較，16h組引起的GES-1細胞凋亡主要為晚期凋亡和/或壞死。4. GES-1細胞加入100umol/L的H2O2作用12h后，Western blot法探測內質網應激標志性蛋白CHOP和GRP78

5、在各個組中的表達，其中和對照組相比H2O2組中CHOP和GRP78蛋白表達增加，而瑞巴派特聯(lián)合H2O2組中的CHOP和GRP78蛋白表達較H2O2組減弱，差異有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）。
　　結論：
　　1. H2O2可抑制GES-1細胞的生長活力，細胞的生長活力隨著H2O2濃度升高和作用時間增加而減弱，瑞巴派特對此過程中 GES-1的正常生長有保護作用。
　　2. GES-1細胞在短時間低濃度的H2O2（100um