H2O2促發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導心肌細胞凋亡.pdf

1、目的：氧化應激可直接導致心肌細胞凋亡，又通過信號轉導通路而誘導心肌細胞發(fā)生凋亡[1]。又有研究顯示：心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中都存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasmicreticulum stress，ERS）的調(diào)控機制。氧化應激誘導心肌細胞凋亡是否與ERS的調(diào)控機制有關，有待進一步研究，故探討其可能的作用機制。
　　 方法：給予乳鼠心肌細胞高低兩種濃度和不同時間過氧化氫（H2O2）刺激，實驗分組：對照組，低濃度組（100 μM H2

2、O2）和高濃度組（500 μM H2O2）。采用流式細胞儀檢測各組心肌細胞的凋亡率，通過凋亡率的比較得出最佳作用濃度和時間點；采用蘇木精-伊紅染色法（HE）觀察心肌細胞凋亡的典型形態(tài)；通過Hoechest 染色觀察心肌細胞凋亡的細胞核變化；通過Western Blotting 檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激標志蛋白p-PERK和CHOP的表達變化。進一步采用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑化學伴侶PBA（4-phenylbutyricacid）抑制心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，

3、通過Western Blotting 檢測p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表達變化；采用流式細胞儀檢測Caspase-12和Caspase-3的活性。
　　 結果：（1）H2O2（100μM）刺激心肌細胞8h 時心肌細胞凋亡率為最高。（2）心肌細胞呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)：細胞質(zhì)膜保持完整，但核發(fā)生固縮，邊緣化等改變。（3）心肌細胞發(fā)生凋亡時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激標志蛋白p-PERK和CHOP表達顯著增高；H2O2 處理心肌細胞8h組p-P

4、ERK和CHOP 蛋白表達為最高。（4）加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑PBA預處理心肌細胞后可有效抑制心肌細胞凋亡；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的標志蛋白p-PERK、CHOP和p的表達與H2O2 處理組相比亦顯著下降（P＜0.01）；Caspase-3和Caspase-12的活性與H2O2 處理組相比亦顯著下調(diào)（P＜0.01）。
　　 結論：低濃度H2O2（100μM）可顯著誘導心肌細胞凋亡，高濃度H2O2（500μM）則導致心肌細胞發(fā)生壞死；低濃度H2