MiR-106b調(diào)控靶基因Smad7通過EMT促進食管鱗癌的侵襲和轉移.pdf

1、目的:研究微小 RNAl06b(miR-106b)在食管癌浸潤轉移中的作用機制，及其對Smad7的調(diào)控影響，為臨床治療食管癌提供新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.在組織水平，免疫組織化學方法檢測90對食管鱗癌及其對應的正常食管組織中Smad7的表達情況，分析miR-106b與Smad7的相關性，探討miR-106b、Smad7表達水平與臨床病理參數(shù)的相關性。
　　2.在細胞水平，分別轉染慢病毒 LV-has-mir-

2、106b和陰性對照病毒CON238于食管癌細胞株KYSE150，轉染慢病毒LV-has-mir-106b-inhibition和陰性對照病毒CON137于食管癌細胞株KYSE450后，實驗分為上調(diào)組和下調(diào)組。
　　上調(diào)組：control組(未轉染miR-106b的KYSE150細胞組)、NC組(轉染隨機序列組，陰性對照病毒CON238)和miR-106b組(轉染miR-106b的KYSE150的細胞組)；
　　下調(diào)組：con

3、trol組(未轉染miR-106b-inhibition的KYSE450細胞組)、NC-inhibitor組(轉染隨機序列組，陰性對照病毒CON137)和miR-106b-inhibition組(轉染miR-106b-inhibitor的KYSE450細胞組);
　　采用實時熒光定量聚合酶聯(lián)反應（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）和免疫印跡（Western Blot）分別檢測miR-106b、S

4、mad7 mRNA的表達水平、Smad7的蛋白表達水平和EMT的相關標記物(上皮型鈣黏蛋白（E-Cadherin）、神經(jīng)型鈣黏蛋白(N-Cadherin）的蛋白表達水平，四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法（MTT法）檢測細胞的增殖能力，劃痕實驗檢測細胞的遷移能力，Transwell方法檢測細胞的侵襲能力，流式細胞術檢測細胞凋亡情況，雙熒光素酶報告基因實驗驗證miR-106與Smad7的調(diào)控關系。
　　結果:
　　1. Smad7

5、在食管鱗癌組織中的表達顯著低于對應的正常食管組織(P<0.05)，其表達水平與腫瘤的淋巴結轉移相關(P<0.05)，與年齡、性別、分化程度、大體分型無關(P﹥0.05)。
　　2.慢病毒穩(wěn)定轉染 miR-106b后，Smad7 mRNA表達水平和蛋白表達水平明顯降低(P<0.05)。食管癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力均增強(P<0.05)；qRT-PCR與Western blot檢測顯示miR-106b組E-Cadherin表達較N

6、C組、control組、明顯降低(P<0.05)；N-Cadherin表達明顯升高(P<0.05)。反之，慢病毒穩(wěn)定轉染miR-106b-inhibition后，Smad7 mRNA表達水平和蛋白表達水平明顯升高(P<0.05)，食管癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力均降低(P<0.05)；qRT-PCR與Western blot檢測顯示miR-106b-inhibition組E-Cadherin表達較NC-inhibitor組、contro