紅色熒光蛋白標(biāo)記的鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)運(yùn)動及定植情況研究.pdf

1、隨著人們對飲食及健康之間關(guān)系的日益關(guān)注，研究和開發(fā)出健康和功能性食品已經(jīng)成為目前食品科學(xué)研究的一個重要趨勢。據(jù)報道，攝入益生菌會調(diào)節(jié)腸道菌群，增強(qiáng)宿主的免疫力。益生菌發(fā)揮其有益作用的前提是可以順利通過消化道并黏附或定植在腸道粘液或上皮細(xì)胞。這需要該菌株具有對胃液中酸性環(huán)境的耐受性及對小腸中膽鹽的抵抗力。鼠李糖乳桿菌是分離自健康人體腸道，現(xiàn)已被世界所了解，屬于第三代益生菌。該菌株的優(yōu)勢主要表現(xiàn)在對膽汁和胃酸的耐受性，能在人體內(nèi)長時間定殖及

2、較穩(wěn)定的存在于乳制品中。鑒于鼠李糖乳桿菌的重要益生作用與特點(diǎn)，對其在腸道內(nèi)定植機(jī)理的研究顯得至關(guān)重要。而低聚糖作為研究較多益生元，是公認(rèn)的雙歧因子，它不能被宿主吸收消化和被病原菌利用，僅能被益生菌利用，因此低聚糖類可促進(jìn)益生菌大量繁殖，增強(qiáng)益生菌的競爭優(yōu)勢。本試驗(yàn)以低聚糖類益生元為試驗(yàn)材料，鼠李糖乳桿菌05-28為受試菌株，首先用紅色熒光蛋白dsred2標(biāo)記鼠李糖乳桿菌05-28，將該重組菌株灌胃小鼠，觀察該菌在小鼠腸道各部位定植規(guī)律，

3、然后在體外篩選出對重組鼠李糖乳桿菌增殖能力較強(qiáng)的低聚糖，進(jìn)一步研究低聚糖在小鼠體內(nèi)對重組菌株的影響。
　　本研究首先將重組質(zhì)粒pMG36e-dsred2電轉(zhuǎn)化到鼠李糖乳桿菌05-28后，經(jīng)過菌液PCR及提取質(zhì)粒驗(yàn)證，質(zhì)粒pMG36e-dsred2成功轉(zhuǎn)入試驗(yàn)菌株中。用熒光顯微鏡觀察重組鼠李糖乳桿菌可看到明顯紅色熒光，dsred2基因在受試菌株中表達(dá)。隨后檢測鼠李糖乳桿菌05-28及重組鼠李糖乳桿菌對人工胃液胃腸液的耐受能力。經(jīng)人工

4、胃腸液消化后兩株菌存活率均無明顯差異?？捎弥亟M鼠李糖乳桿菌進(jìn)行后續(xù)小鼠腸道內(nèi)定植情況的探究試驗(yàn)。
　　將重組鼠李乳桿菌灌胃BALB/c小鼠，取其各腸道制作石蠟切片，利用熒光顯微鏡觀察重組菌株在小鼠腸道黏附情況，圖片顯示重組菌株能黏附于小鼠腸道絨毛。然后檢測其在腸道內(nèi)的定植規(guī)律，在口服3h后小鼠腸道各部位均能檢測到重組菌株，4天后達(dá)到定植的高峰，第7天留在小鼠腸道粘膜表面的重組菌株十二指腸占第1天的14.10％、空腸為14.35％、

5、回腸為36.01％、結(jié)腸為27.3％，第15天小鼠各腸道均未檢測到重組菌株，定植規(guī)律為回腸＞結(jié)腸＞空場＞十二指腸。
　　本試驗(yàn)采用比濁法研究了低聚果糖、低聚木糖、低聚異麥芽糖及菊粉在體外對重組鼠李糖乳桿菌生長情況的影響。篩選出兩種對重組菌株具有較好的增菌作用的低聚糖。即低聚果糖在添加量為2.4％，低聚木糖添加量為1.2％時，對重組菌株增值效果最好。因此，進(jìn)一步研究低聚果糖及低聚木糖在小鼠腸道內(nèi)對重組菌株的影響。
　　將BAL

6、B/c雄性小鼠隨機(jī)分為7組，對照組給予的重組菌及PBS，試驗(yàn)組分別給予重組菌及低、中、高劑量的低聚果糖及低聚木糖，連續(xù)給予14天。在連續(xù)給予小鼠低聚果糖7天后，與對照組相比低、中、高劑量組重組菌的數(shù)量均無明顯變化。連續(xù)給予14天除低劑量組無明顯變化外，中、高劑量組均能顯著的增殖重組鼠李糖乳桿菌。連續(xù)灌胃小鼠低聚木糖7天，與對照組相比低、中劑量組重組鼠李糖乳桿菌的數(shù)量無明顯變化，高劑量組有明顯增加。連續(xù)灌胃14天低、中、高劑量組均能顯著的