紅色熒光蛋白標(biāo)記的鼠李糖乳桿菌在小鼠腸道內(nèi)運(yùn)動(dòng)及定植情況研究.pdf

1、隨著人們對(duì)飲食及健康之間關(guān)系的日益關(guān)注，研究和開(kāi)發(fā)出健康和功能性食品已經(jīng)成為目前食品科學(xué)研究的一個(gè)重要趨勢(shì)。據(jù)報(bào)道，攝入益生菌會(huì)調(diào)節(jié)腸道菌群，增強(qiáng)宿主的免疫力。益生菌發(fā)揮其有益作用的前提是可以順利通過(guò)消化道并黏附或定植在腸道粘液或上皮細(xì)胞。這需要該菌株具有對(duì)胃液中酸性環(huán)境的耐受性及對(duì)小腸中膽鹽的抵抗力。鼠李糖乳桿菌是分離自健康人體腸道，現(xiàn)已被世界所了解，屬于第三代益生菌。該菌株的優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在對(duì)膽汁和胃酸的耐受性，能在人體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間定殖及

2、較穩(wěn)定的存在于乳制品中。鑒于鼠李糖乳桿菌的重要益生作用與特點(diǎn)，對(duì)其在腸道內(nèi)定植機(jī)理的研究顯得至關(guān)重要。而低聚糖作為研究較多益生元，是公認(rèn)的雙歧因子，它不能被宿主吸收消化和被病原菌利用，僅能被益生菌利用，因此低聚糖類(lèi)可促進(jìn)益生菌大量繁殖，增強(qiáng)益生菌的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。本試驗(yàn)以低聚糖類(lèi)益生元為試驗(yàn)材料，鼠李糖乳桿菌05-28為受試菌株，首先用紅色熒光蛋白dsred2標(biāo)記鼠李糖乳桿菌05-28，將該重組菌株灌胃小鼠，觀察該菌在小鼠腸道各部位定植規(guī)律，

3、然后在體外篩選出對(duì)重組鼠李糖乳桿菌增殖能力較強(qiáng)的低聚糖，進(jìn)一步研究低聚糖在小鼠體內(nèi)對(duì)重組菌株的影響。
　　本研究首先將重組質(zhì)粒pMG36e-dsred2電轉(zhuǎn)化到鼠李糖乳桿菌05-28后，經(jīng)過(guò)菌液PCR及提取質(zhì)粒驗(yàn)證，質(zhì)粒pMG36e-dsred2成功轉(zhuǎn)入試驗(yàn)菌株中。用熒光顯微鏡觀察重組鼠李糖乳桿菌可看到明顯紅色熒光，dsred2基因在受試菌株中表達(dá)。隨后檢測(cè)鼠李糖乳桿菌05-28及重組鼠李糖乳桿菌對(duì)人工胃液胃腸液的耐受能力。經(jīng)人工

4、胃腸液消化后兩株菌存活率均無(wú)明顯差異。可用重組鼠李糖乳桿菌進(jìn)行后續(xù)小鼠腸道內(nèi)定植情況的探究試驗(yàn)。
　　將重組鼠李乳桿菌灌胃BALB/c小鼠，取其各腸道制作石蠟切片，利用熒光顯微鏡觀察重組菌株在小鼠腸道黏附情況，圖片顯示重組菌株能黏附于小鼠腸道絨毛。然后檢測(cè)其在腸道內(nèi)的定植規(guī)律，在口服3h后小鼠腸道各部位均能檢測(cè)到重組菌株，4天后達(dá)到定植的高峰，第7天留在小鼠腸道粘膜表面的重組菌株十二指腸占第1天的14.10％、空腸為14.35％、

5、回腸為36.01％、結(jié)腸為27.3％，第15天小鼠各腸道均未檢測(cè)到重組菌株，定植規(guī)律為回腸＞結(jié)腸＞空?qǐng)觯臼改c。
　　本試驗(yàn)采用比濁法研究了低聚果糖、低聚木糖、低聚異麥芽糖及菊粉在體外對(duì)重組鼠李糖乳桿菌生長(zhǎng)情況的影響。篩選出兩種對(duì)重組菌株具有較好的增菌作用的低聚糖。即低聚果糖在添加量為2.4％，低聚木糖添加量為1.2％時(shí)，對(duì)重組菌株增值效果最好。因此，進(jìn)一步研究低聚果糖及低聚木糖在小鼠腸道內(nèi)對(duì)重組菌株的影響。
　　將BAL

6、B/c雄性小鼠隨機(jī)分為7組，對(duì)照組給予的重組菌及PBS，試驗(yàn)組分別給予重組菌及低、中、高劑量的低聚果糖及低聚木糖，連續(xù)給予14天。在連續(xù)給予小鼠低聚果糖7天后，與對(duì)照組相比低、中、高劑量組重組菌的數(shù)量均無(wú)明顯變化。連續(xù)給予14天除低劑量組無(wú)明顯變化外，中、高劑量組均能顯著的增殖重組鼠李糖乳桿菌。連續(xù)灌胃小鼠低聚木糖7天，與對(duì)照組相比低、中劑量組重組鼠李糖乳桿菌的數(shù)量無(wú)明顯變化，高劑量組有明顯增加。連續(xù)灌胃14天低、中、高劑量組均能顯著的