2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩42頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:流行病學研究發(fā)現(xiàn),慢性腎臟?。–KD)發(fā)病率逐年升高,目前成為了世界性難題,研究顯示心血管疾病(CVD)成為CKD患者首位死因,而血管鈣化是心血管疾病發(fā)生的獨立危險因素。血管中膜鈣化是CKD患者血管鈣化的主要特征。血管平滑肌細胞(VSMCs)作為血管中膜的重要組成成分,研究發(fā)現(xiàn),酸性環(huán)境可以抑制血管中膜鈣化,但其具體機制尚不明確。本研究探討酸性環(huán)境對慢性腎衰竭大鼠血管鈣化的影響及可能機制。
  方法:
  1.實驗分組

2、和模型構(gòu)建
  1.1以行5/6腎切除術(shù)來構(gòu)建大鼠慢性腎衰竭的模型,再通過飼喂骨化三醇引起大鼠血管鈣化的發(fā)生,飼喂NH4CL構(gòu)建大鼠的慢性代謝性酸中毒的模型。將22只健康雄性SD大鼠,將大鼠隨機分成4組,即假手術(shù)組(sham;n=6)、慢性腎衰竭組(CKD;n=5)、鈣化組(CKD+VC;n=5)和酸干預組(CKD+VC+AC;n=6)。于大鼠的腹主動脈穿刺采血,血氣分析測定動脈血pH,動脈血用肝素抗凝,離心后,分離血漿,-80℃

3、凍存?zhèn)溆?。取大鼠胸腹主動脈全長,用于組織學觀察和鈣含量測定。
  1.2體外細胞實驗用10mMβ-甘油磷酸誘導VSMCs鈣化,依據(jù)動物實驗大鼠血氣分析結(jié)果,酸干預大鼠動脈血氣 pH值為7.143±0.163,體外實驗為更好模擬體內(nèi)實驗,選定酸干預組pH值為7.1。將VSMCs隨機分為4組:(1)正常+pH7.4組;(2)高磷+pH7.1組;(3)高磷+pH7.4組;(4)維拉帕米干預組。
  2.大鼠標本采集與處理:5周之后

4、用2%戊巴比妥鈉30mg/kg予大鼠麻醉,腹主動脈穿刺,應用血氣分析儀檢測動脈pH、[HCO3-]濃度,同時采血用Unicel Dxc800全自動生化分析儀檢測大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。摘取胸主動脈全段:上段組織保存于液氮用于鈣含量檢測;下段用10%甲醛固定后石蠟包埋行鈣化染色及 runx2和 LTCCβ3亞基免疫組織化學染色。血管 von Kossa鈣化染色檢測血管鈣化情況,鈣鹽沉積處被染為黑色。血管鈣含量測定:鄰甲酚酞

5、絡合酮比色法測定鈣含量,以mg/g為單位。免疫組織化學法檢測血管runx2和LTCCβ3表達
  3.各組VSMCs目的基因的表達:提取細胞干預4天后正常+pH7.4組、高磷+pH7.1組、高磷+pH7.4組、維拉帕米干預組mRNA,測定L型鈣通道(cium channels, L-type, LTCC)β3亞基和runx2基因的表達。
  4.各組VSMCs目的蛋白的表達:Western印跡:L型鈣通道(calcium c

6、hannels, L-type, LTCC)β3亞基和runx2蛋白的表達。
  5.VSMCs鈣化情況及ALP的活性測定。細胞鈣含量測定:細胞培養(yǎng)14天后棄去上清,BCA法測定細胞蛋白含量,結(jié)果用蛋白含量標準化鈣含量(mg/g蛋白)。茜素紅鈣化染色:茜素紅(0.1%,pH8.3)染液中37℃溫箱賦育30 min,結(jié)果判斷標準:鈣鹽沉積為橘紅色。ALP活性測定:依據(jù)ALP活性試劑盒測定ALP活性,結(jié)果用蛋白質(zhì)校準ALP活性。

7、>  6.血管平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度測定:在細胞刺激4天,采用鈣離子探針檢測VSMCs內(nèi)鈣離子濃度。
  結(jié)果:
  1.體外酸性環(huán)境對高磷誘導的VSMCs鈣化的影響:細胞培養(yǎng)14天后,鈣含量結(jié)果與鈣化茜素紅染色一致,與正常+pH7.4組相比,高磷+pH7.4組鈣含量明顯增多,鈣鹽沉積較多;與高磷+pH7.4組相比,高磷+pH7.1組細胞鈣含量明顯減少,橘紅色鈣鹽沉積較少。
  2.體外酸性環(huán)境對高磷誘導的VSMCs

8、LTCCβ3亞基的表達和細胞外鈣離子內(nèi)流效應的影響:RT-PCR和western印記結(jié)果顯示,高磷+pH7.4組LTCCβ3亞基mRNA表達和蛋白水平較正常+pH7.4組增加;但是高磷+pH7.1組的表達量明顯較高磷+pH7.4組表達減少。血管平滑肌細胞Fluo-3/AM熒光強度和熒光顯色結(jié)果顯示,與正常+pH7.4組相比,高磷+pH7.4組血管平滑肌細胞熒光強度增加;與高磷+pH7.4組相比,高磷+pH7.1組胞內(nèi)的熒光強度下降。

9、r>  3.體外酸性環(huán)境對高磷誘導的大鼠VSMCs runx2表達和ALP活性的影響:RT-PCR和western印記結(jié)果顯示保持一致,同正常+pH7.4組相比,高磷+pH7.4組runx2表達水平增加;與高磷+pH7.4組相比,高磷+pH7.1組表達量明顯減少。ALP活性測定結(jié)果顯示:酸性環(huán)境抑制了ALP活性。維拉帕米阻斷LTCC后,減少細胞內(nèi)鈣離子熒光強度,抑制高磷誘導的runx2表達,減少鈣鹽沉積。
  4.酸性環(huán)境對慢性腎

10、衰竭大鼠主動脈鈣化情況比較:與假手術(shù)組(n=6)大鼠相比,慢性腎衰竭組(n=5)、鈣化組(n=5)及酸干預組(n=6)大鼠血肌酐和尿素氮水平均顯著增高;與假手術(shù)組、慢性腎衰竭組(n=5)、鈣化組(n=5)分別比較,酸干預組大鼠動脈血pH和[HCO3-]水平均下降。鈣含量結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比較,慢性腎衰竭組大鼠主動脈鈣含量無明顯增高(2.33±0.42vs2.41±0.41,P>0.05),鈣化組大鼠主動脈鈣含量顯著增高(9.66±1

11、.62vs2.41±0.41,P<0.05);與鈣化組相比,酸干預大鼠主動脈鈣含量明顯降低(4.83±0.73vs9.66±1.62,P<0.05)。von Kossa染色結(jié)果保持一致。
  5.體內(nèi)酸性環(huán)境對慢性腎衰竭大鼠LTCCβ3亞基和runx2在主動脈的表達的影響:免疫組織化學結(jié)果顯示,假手術(shù)組和慢性腎衰竭組runx2和LTCCβ3亞基免疫組化評分均低于鈣化組(6.20±1.64vs2.16±0.75,6.20±1.64v

12、s3.00±1.00,6.60±2.51vs1.83±0.98,6.60±2.51vs2.60±0.55),差異有統(tǒng)計學意義;大鼠體內(nèi)酸性環(huán)境下調(diào) runx2和 LTCCβ3亞基的表達(6.20±1.64vs3.83±1.33,6.60±2.51vs3.00±1.45, P<0.05)。
  結(jié)論:酸性環(huán)境可以抑制VSMCs的鈣化,其機制可能是酸性環(huán)境通過下調(diào)L型鈣通道β3亞基表達,阻滯鈣離子內(nèi)流,來起到抗VSMCs成骨成軟骨樣表

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論