鎂對高磷誘導慢性腎衰竭大鼠胸主動脈血管鈣化作用的研究.pdf

1、目的:
　　心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是慢性腎臟病(chronic kidneydisease，CKD)患者的主要并發(fā)癥之一，血管鈣化是導致CKD患者發(fā)生CVD的首要原因。血管鈣化類似于成骨或成軟骨過程，并由多種細胞、分子共同參與調節(jié)，但其發(fā)生機制迄今尚未完全闡明。目前高磷血癥是參與CKD患者血管鈣化形成的主要危險因素之一。研究發(fā)現(xiàn)細胞外磷通過血管平滑肌細胞(VSMCs)上的鈉磷協(xié)同轉運體（

2、Pit-1）進入細胞內(nèi)，通過誘導VSMCs向成骨或成軟骨樣細胞轉分化，導致了血管鈣化的發(fā)生。目前臨床上對于血管鈣化的防治尚沒有較好的方法。隨著對血管鈣化研究的深入，近來研究發(fā)現(xiàn)基質GlA蛋白、胎球蛋白-A、骨橋蛋白、骨保護蛋白等都對血管鈣化有保護性作用。但目前關于鎂離子與CKD血管鈣化的研究較少，為此本實驗建立了慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型，觀察鎂對主動脈血管鈣化及彈性功能的影響，并對其可能機制進行了初步探討。
　　方法:
　

3、　1實驗對象
　　本論文采用完全隨機對照的研究方法，將于河北醫(yī)科大學動物實驗中心購買的32只清潔級、健康、雄性、5周齡的SD大鼠，在河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院動物中心屏障環(huán)境適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分為4組:正常對照組、慢性腎衰竭血管鈣化組、低鎂組、高鎂組。分別用硫酸腺嘌呤灌胃(600mg/kg/d)14天+高磷飲食(P1.2％)13周復制慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型，分別給予不同濃度鎂飲食(Mg0.02％，0.05％，0.15％)干預。<

4、br>　　2實驗標本的留取
　　四組大鼠于屏障環(huán)境飼養(yǎng)15周后通過心臟取血留取血標本，處死大鼠后取其胸主動脈全段、腹主動脈全段及腎臟，部分于10％福爾馬林溶液中固定，腹主動脈全段于烤箱80℃中烘干后常溫保存，余標本于-80℃冰箱保存，分離出的血清于-20℃冰箱保存。
　　3慢性腎衰竭大鼠主動脈脈搏波速率的測定
　　通過多導電生理儀記錄動脈的壓力波形，測量大鼠胸主動脈-腹主動脈內(nèi)兩個導管尖端的距離(D)，計算胸主動脈-腹

5、主動脈壓力的時間延遲(T)，計算PWV，PWV=D/T。
　　4慢性腎衰竭大鼠的腎臟病理及血清學指標的檢測
　　對大鼠腎臟組織進行HE染色，觀察腎臟結構的病理改變，化驗血清鈣、磷、鎂、尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。
　　5慢性腎衰竭大鼠的血管HE、Von kossa染色及鈣含量測定方法
　　對大鼠胸主動脈上段血管壁行常規(guī)HE染色及Von kossa鈣化染色，檢測各組胸主動脈的血管鈣化情況。對

6、大鼠腹主動脈全段血管壁用鄰甲酚酞絡合酮比色法檢測主動脈鈣含量。
　　6慢性腎衰竭大鼠胸主動脈核心結合因子α1（cbfα1）mRNA表達情況
　　對大鼠胸主動脈下段血管壁用RT-PCR方法檢測主動脈血管鈣化標志分子核心結合因子α1（cbfα1）mRNA的表達情況。
　　7統(tǒng)計分析
　　采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差((x)±s)表示，兩組間均數(shù)比較用t檢

7、驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），用S-N-K檢驗(Student-Newman-Keuls，SNK)作多組間均數(shù)兩兩比較。余者采用秩和檢驗和Spearman相關分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1高磷誘導慢性腎衰竭大鼠模型的構建
　　腎臟大體觀察:腎臟明顯腫脹，呈灰白色，表面呈細顆粒狀，缺乏光澤，為“大白腎”，腎被膜與腎實質粘連，不易剝脫，切面皮、髓質界限不清。
　　腎臟

8、HE染色:腎小管內(nèi)可見大量棕黑色結晶，異物巨細胞肉芽腫形成，灶狀腎小管擴張，部分可見少量蛋白管型，間質灶片狀淋巴單核細胞浸潤伴纖維化（見圖1b）。
　　血清學指標:與正常對照組比較，慢性腎衰竭鈣化組、低鎂組、高鎂組的Scr、BUN、Ca、P、Ca×P均明顯升高（P＜0.05）;慢性腎衰竭鈣化組、低鎂組、高鎂組之間的Scr、BUN、Ca、P、Ca×P無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　2鎂對高磷誘導慢性腎衰竭大鼠主動脈血管彈性

9、功能及鈣化的影響
　　與正常對照組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈PWV明顯增快、鈣含量明顯增高(P＜0.05)，主動脈Von kossa染色:主動脈血管中膜可見大量棕黑色顆粒沉積（圖1b）。與慢性腎衰竭血管鈣化組比較，低鎂組的主動脈血管PWV和鈣含量明顯升高（P＜0.05），主動脈鈣化進一步加重。高鎂組主動脈血管PWV和鈣含量明顯降低（P＜0.05），主動脈血管鈣化減輕。
　　3鎂對高磷誘導慢性腎衰竭大鼠主動脈Cbfα1m

10、RNA表達情況
　　與正常對照組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動脈Cbfα1mRNA表達明顯升高（P＜0.05）;與慢性腎衰竭血管鈣化組比較，低鎂組的主動脈Cbfα1mRNA表達明顯升高（P＜0.05），高鎂組主動脈Cbfα1mRNA表達明顯降低(P＜0.05)。
　　結論:
　　1高鎂可抑制高磷誘導慢性腎衰竭大鼠胸主動脈的血管鈣化，改善血管彈性功能。
　　2鎂離子通過降低主動脈血管平滑肌細胞cbfα1的表達來抑制