鎂對(duì)高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠胸主動(dòng)脈血管鈣化作用的研究.pdf

1、目的:
　　心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是慢性腎臟病(chronic kidneydisease，CKD)患者的主要并發(fā)癥之一，血管鈣化是導(dǎo)致CKD患者發(fā)生CVD的首要原因。血管鈣化類(lèi)似于成骨或成軟骨過(guò)程，并由多種細(xì)胞、分子共同參與調(diào)節(jié)，但其發(fā)生機(jī)制迄今尚未完全闡明。目前高磷血癥是參與CKD患者血管鈣化形成的主要危險(xiǎn)因素之一。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外磷通過(guò)血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)上的鈉磷協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)體（

2、Pit-1）進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)誘導(dǎo)VSMCs向成骨或成軟骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，導(dǎo)致了血管鈣化的發(fā)生。目前臨床上對(duì)于血管鈣化的防治尚沒(méi)有較好的方法。隨著對(duì)血管鈣化研究的深入，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)GlA蛋白、胎球蛋白-A、骨橋蛋白、骨保護(hù)蛋白等都對(duì)血管鈣化有保護(hù)性作用。但目前關(guān)于鎂離子與CKD血管鈣化的研究較少，為此本實(shí)驗(yàn)建立了慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型，觀察鎂對(duì)主動(dòng)脈血管鈣化及彈性功能的影響，并對(duì)其可能機(jī)制進(jìn)行了初步探討。
　　方法:
　

3、　1實(shí)驗(yàn)對(duì)象
　　本論文采用完全隨機(jī)對(duì)照的研究方法，將于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購(gòu)買(mǎi)的32只清潔級(jí)、健康、雄性、5周齡的SD大鼠，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動(dòng)物中心屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、慢性腎衰竭血管鈣化組、低鎂組、高鎂組。分別用硫酸腺嘌呤灌胃(600mg/kg/d)14天+高磷飲食(P1.2％)13周復(fù)制慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型，分別給予不同濃度鎂飲食(Mg0.02％，0.05％，0.15％)干預(yù)。<

4、br>　　2實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的留取
　　四組大鼠于屏障環(huán)境飼養(yǎng)15周后通過(guò)心臟取血留取血標(biāo)本，處死大鼠后取其胸主動(dòng)脈全段、腹主動(dòng)脈全段及腎臟，部分于10％福爾馬林溶液中固定，腹主動(dòng)脈全段于烤箱80℃中烘干后常溫保存，余標(biāo)本于-80℃冰箱保存，分離出的血清于-20℃冰箱保存。
　　3慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈脈搏波速率的測(cè)定
　　通過(guò)多導(dǎo)電生理儀記錄動(dòng)脈的壓力波形，測(cè)量大鼠胸主動(dòng)脈-腹主動(dòng)脈內(nèi)兩個(gè)導(dǎo)管尖端的距離(D)，計(jì)算胸主動(dòng)脈-腹

5、主動(dòng)脈壓力的時(shí)間延遲(T)，計(jì)算PWV，PWV=D/T。
　　4慢性腎衰竭大鼠的腎臟病理及血清學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)
　　對(duì)大鼠腎臟組織進(jìn)行HE染色，觀察腎臟結(jié)構(gòu)的病理改變，化驗(yàn)血清鈣、磷、鎂、尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。
　　5慢性腎衰竭大鼠的血管HE、Von kossa染色及鈣含量測(cè)定方法
　　對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈上段血管壁行常規(guī)HE染色及Von kossa鈣化染色，檢測(cè)各組胸主動(dòng)脈的血管鈣化情況。對(duì)

6、大鼠腹主動(dòng)脈全段血管壁用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法檢測(cè)主動(dòng)脈鈣含量。
　　6慢性腎衰竭大鼠胸主動(dòng)脈核心結(jié)合因子α1（cbfα1）mRNA表達(dá)情況
　　對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈下段血管壁用RT-PCR方法檢測(cè)主動(dòng)脈血管鈣化標(biāo)志分子核心結(jié)合因子α1（cbfα1）mRNA的表達(dá)情況。
　　7統(tǒng)計(jì)分析
　　采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，兩組間均數(shù)比較用t檢

7、驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），用S-N-K檢驗(yàn)(Student-Newman-Keuls，SNK)作多組間均數(shù)兩兩比較。余者采用秩和檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠模型的構(gòu)建
　　腎臟大體觀察:腎臟明顯腫脹，呈灰白色，表面呈細(xì)顆粒狀，缺乏光澤，為“大白腎”，腎被膜與腎實(shí)質(zhì)粘連，不易剝脫，切面皮、髓質(zhì)界限不清。
　　腎臟

8、HE染色:腎小管內(nèi)可見(jiàn)大量棕黑色結(jié)晶，異物巨細(xì)胞肉芽腫形成，灶狀腎小管擴(kuò)張，部分可見(jiàn)少量蛋白管型，間質(zhì)灶片狀淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)伴纖維化（見(jiàn)圖1b）。
　　血清學(xué)指標(biāo):與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭鈣化組、低鎂組、高鎂組的Scr、BUN、Ca、P、Ca×P均明顯升高（P＜0.05）;慢性腎衰竭鈣化組、低鎂組、高鎂組之間的Scr、BUN、Ca、P、Ca×P無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2鎂對(duì)高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈血管彈性

9、功能及鈣化的影響
　　與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈PWV明顯增快、鈣含量明顯增高(P＜0.05)，主動(dòng)脈Von kossa染色:主動(dòng)脈血管中膜可見(jiàn)大量棕黑色顆粒沉積（圖1b）。與慢性腎衰竭血管鈣化組比較，低鎂組的主動(dòng)脈血管PWV和鈣含量明顯升高（P＜0.05），主動(dòng)脈鈣化進(jìn)一步加重。高鎂組主動(dòng)脈血管PWV和鈣含量明顯降低（P＜0.05），主動(dòng)脈血管鈣化減輕。
　　3鎂對(duì)高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈Cbfα1m

10、RNA表達(dá)情況
　　與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈Cbfα1mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05）;與慢性腎衰竭血管鈣化組比較，低鎂組的主動(dòng)脈Cbfα1mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05），高鎂組主動(dòng)脈Cbfα1mRNA表達(dá)明顯降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1高鎂可抑制高磷誘導(dǎo)慢性腎衰竭大鼠胸主動(dòng)脈的血管鈣化，改善血管彈性功能。
　　2鎂離子通過(guò)降低主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞cbfα1的表達(dá)來(lái)抑制